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文檔簡介
1、目的:本實驗主要探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠(MRL/lpr)骨TNF-α/NF-κB和BMP/Smad信號通路與骨代謝的關(guān)系。
方法:1、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠(MRL/lpr)與正常對照組小鼠(C3H/HeJ)血漿補體C3的水平。
2、常規(guī)制備兩組小鼠腎臟石蠟組織切片,蘇木素—伊紅(HE)染色法觀察腎臟病理學改變。
3、常規(guī)制備兩組小鼠股骨石蠟組織切片,蘇木素—伊紅(HE)染色法觀
2、察骨質(zhì)情況。
4、免疫組織化學(IHC)染色法檢測兩組小鼠骨組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、細胞核因子-κB p50(NF-κB p50)、BMP-2、pSmad1/5/8蛋白表達的情況。
5、分別用滅菌注射用水和TNF-α抑制劑益賽普(etanercept)皮下注射發(fā)病的MRL/Lpr小鼠,四周后,HE染色法觀察骨質(zhì)情況,IHC染色法觀察骨TNF-α、NF-κBp50、BMP-2和pSmad1/5/8蛋白表達
3、的情況。
結(jié)果:1、與C3H/HeJ小鼠相比,MRL/lpr狼瘡小鼠血漿補體C3的水平下降(n=6,P<0.05)。
2、MRL/lpr狼瘡鼠腎臟HE染色可見腎小球毛細血管壁嚴重損傷,腎小球上皮細胞增生、變性,腎小管上皮細胞變性,腎小囊囊腔變小,有些腎單位出現(xiàn)球-囊粘連,腎小球和腎間質(zhì)內(nèi)有大量淋巴細胞浸潤。C3H/HeJ小鼠腎臟結(jié)構(gòu)大致正常。
3、與C3H/HeJ小鼠相比,MRL/lpr狼瘡小鼠骨小梁松散,
4、出現(xiàn)骨量丟失(n=6,P<0.01)。
4、MRL/lpr狼瘡小鼠與C3H/HeJ小鼠相比,股骨TNF-α蛋白的表達明顯升高(n=6,P<0.01),NF-κB p50蛋白的表達亦升高(n=6,P<0.05);BMP-2和pSmad1/5/8蛋白的表達兩組之間沒有統(tǒng)計學差異。
5、與注射滅菌注射用水的MRL/Lpr小鼠相比,皮下注射益賽普的MRL/Lpr小鼠HE染色顯示骨量丟失的程度輕(n=6,P<0.05),股骨I
5、HC染色顯示TNF-α蛋白表達明顯降低(n=6,P<0.01),NF-κB p50蛋白表達明顯降低(n=6,P<0.01);BMP-2和pSmad1/5/8蛋白的表達兩組之間沒有統(tǒng)計學差異。
結(jié)論:1、MRL/lpr狼瘡小鼠出現(xiàn)骨量丟失和腎臟慢性炎癥,骨TNF-α/NF-κB信號通路處于異?;罨癄顟B(tài),BMP/Smad信號通路未見明顯變化。
2、通過抑制TNF-α的表達可以抑制MRL/lpr狼瘡鼠骨TNF-α/NF-κ
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