UBXN1調(diào)控NF-κB信號(hào)通路的機(jī)制研究.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在生長(zhǎng)發(fā)育、免疫應(yīng)答、炎性因子的誘導(dǎo)等多種細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要功能。NF-κB的異常激活與多種類型的腫瘤、自身免疫性疾病以及慢性炎癥綜合癥密切相關(guān)。目前，NF-κB的激活過(guò)程已被廣泛研究并清楚闡明，而NF-κB是如何被滅活的仍不清楚。因此，探討NF-κB信號(hào)通路的滅活機(jī)制，已經(jīng)成為相關(guān)疾病治療研究的新方向。
　　研究發(fā)現(xiàn)，泛素化修飾在NF-κB信號(hào)通路中至關(guān)重要。泛素結(jié)合蛋白是一類重要的泛素修飾調(diào)控蛋白質(zhì)。包

2、含UBA結(jié)構(gòu)域的泛素結(jié)合蛋白家族是其中最大的一類。目前對(duì)于包含UBA結(jié)構(gòu)域的泛素結(jié)合蛋白家族在NF-κB信號(hào)通路中的功能和機(jī)制研究尚待深入。因此，我們構(gòu)建了靶向人類基因組中含有UBA結(jié)構(gòu)域基因的siRNA文庫(kù)，以找到新的NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)子。在篩選中我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的含有泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的NF-κB信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控子UBXN1。
　　UBXN1最初作為一個(gè)泛素結(jié)合蛋白被鑒定出來(lái)（命名為Y33K）。最近的研究發(fā)現(xiàn)，UBXN1作為

3、干擾素通路的下游靶基因，在病毒感染的后期被強(qiáng)烈誘導(dǎo)表達(dá)，從而在病毒感染的后期通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)TRAF3/6與MAVS的結(jié)合及MAVS的寡聚化及時(shí)滅活RNA病毒感染引起的干擾素通路和NF-κB通路的激活，避免了過(guò)度炎癥的發(fā)生。然而它對(duì)于TNFα誘導(dǎo)的經(jīng)典NF-κB信號(hào)通路激活的影響卻是不清楚的。
　　利用NF-κB的雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)，我們發(fā)現(xiàn)敲低UBXN1顯著提高TNFα誘導(dǎo)的NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性;過(guò)表達(dá)UBXN1顯著抑制TNFα誘導(dǎo)的N

4、F-κB的轉(zhuǎn)錄活性。TNFα誘導(dǎo)的IκBα的降解是NF-κB信號(hào)通路激活的關(guān)鍵步驟。因此，我們通過(guò)蛋白質(zhì)印記實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，敲低UBXN1促進(jìn)TNFα誘導(dǎo)的IκBα的降解;過(guò)表達(dá)UBXN1顯著抑制TNFα誘導(dǎo)的IκBα的降解。進(jìn)一步研究，我們發(fā)現(xiàn)UBXN1能夠顯著的抑制TRADD、TRAF2、RIPK1誘導(dǎo)的NF-κB的激活，而對(duì)TAK1、IKKβss/ee、p65誘導(dǎo)的NF-κB的激活兒乎沒(méi)有影響。這提示UBXN1可能作用于TAK1的上游。