MBD2在急性白血病細胞中的表達及其沉默后對細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：
　　擬在蛋白水平和mRNA水平研究甲基化DNA結合蛋白2（MBD2）在不同白血病細胞系中的表達情況；進一步研究MBD2在初治急性白血病患者中的表達情況，并分析其與患者預后的相關性；研究MBD2基因沉默后，對Jurkat細胞凋亡、細胞周期等生物學行為的影響。
　　方法：
　　1.從不同白血病細胞系中提取總蛋白，通過Western Blot檢測MBD2的蛋白水平表達情況；從上述細胞系中提取總RNA，逆轉錄得cDNA

2、后，通過RT-PCR檢測MBD2的mRNA水平表達情況。
　　2.從初治的急性白血病患者骨髓中提取單個核細胞總RNA，逆轉錄得cDNA后，通過RT-PCR檢測MBD2在mRNA水平的表達情況。通過查閱患者實驗室檢查資料，統(tǒng)計分析得出MBD2表達高低與其危險度分層有無關聯(lián)，從而證實MBD2能否成為一項有意義的治療靶點。
　　3.選取Jurkat為目的細胞系，電轉染siRNA沉默MBD2的表達，通過Western Blot和RT

3、-PCR檢測其有沉默效應的時間點。
　　4.收集電轉染后72小時的Jurkat細胞，分別用Annexin V-PI雙染法，通過流式細胞術檢測細胞凋亡情況；用PI染色檢測細胞周期改變。
　　結果：
　　1.通過對6種不同類型白血病細胞系的MBD2蛋白水平和mRNA水平的表達檢測，發(fā)現(xiàn)其蛋白水平和RNA水平一致表達基本一致。
　　2.通過對41例標本檢測發(fā)現(xiàn)MBD2 mRNA水平在不同白血病類型中表達高低不一致。與對

4、照組相比，髓系白血病中MBD2 mRNA表達未見明顯升高，而淋巴細胞腫瘤中表達有所升高。通過亞組分析發(fā)現(xiàn)在高危B-ALL中表達明顯升高。
　　3.選取轉染si-RNA后48小時、72小時、96小時三個時間點，收集Jurkat細胞通過Western Blot和RT-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)其72小時（蛋白水平和RNA水平）沉默效應最明顯。
　　4.收集轉染后72小時的Jurkat細胞，檢測細胞凋亡率輕微上調(diào)；對細胞周期有阻滯作用，將J