膜引導(dǎo)骨再生過程中VEGF表達的實驗研究.pdf

1、目的：探討膜引導(dǎo)骨組織再生機理及其不同時期VEGF表達規(guī)律，進一步為骨缺損的治療提供實驗依據(jù)。 方法：選擇健康新西蘭大白兔18只，體重2～3公斤，雌雄不限，隨機分成6組，每組3只，采取自身不同側(cè)肢體對照，隨機確定實驗側(cè)與對照側(cè)。實驗側(cè)去除約20mm橈骨外膜，于其中間建立10mm骨缺損動物模型，用硅膠膜(Siliconmembrane)管套接橈骨缺損端，兩端各套入管腔約3mm。對照側(cè)僅截除10mm橈骨連同骨外膜。于術(shù)后第1，2，4

2、，6，8，12周分別行CR攝片后處死1組動物，采集標本處理后行HE染色和VEGF免疫組織化學(xué)染色鏡檢，測量實驗側(cè)和對照側(cè)骨缺損處及膜管外骨痂不同階段VEGF表達的平均灰度值，數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件統(tǒng)計分析，比較差異。 結(jié)果： (1)X線觀察結(jié)果：術(shù)后1周和2周實驗側(cè)管內(nèi)和對照側(cè)無差異，2周時膜管外邊緣處可見骨膜反應(yīng)。術(shù)后第4周，實驗側(cè)兩側(cè)骨斷端均見有骨痂影，膜管外邊緣也見骨痂形成；對照側(cè)骨斷端硬化、髓腔閉合，形成少量

3、骨痂與尺骨愈合，骨缺損形狀不規(guī)則。術(shù)后6周，實驗側(cè)膜管外骨痂增多，可見膜管內(nèi)的密度增高影形狀不規(guī)則；對照側(cè)較前無明顯變化。術(shù)后第8周，實驗側(cè)管內(nèi)新生骨影密度增高，皮質(zhì)尚不連續(xù)，膜管外骨痂較前增大。術(shù)后第12周，實驗側(cè)管內(nèi)骨影連續(xù)，髓腔基本再通；隔膜管外骨痂吸收縮小。 (2)組織學(xué)檢查結(jié)果：術(shù)后1～2周實驗側(cè)管內(nèi)血腫形成，斷端髓腔成骨細胞直接成骨，骨內(nèi)膜、骨髓間質(zhì)細胞增生活躍并向血腫內(nèi)生長；之后血腫機化，形成肉芽組織，與對側(cè)肉芽連

4、接。膜管外骨膜和軟組織增生爬行覆蓋膜管形成密閉腔室。對照側(cè)1周時纖維組織增生，靠近骨端的周圍間質(zhì)細胞形成軟骨，2周有軟骨內(nèi)化骨。4～6周管內(nèi)原始骨痂內(nèi)見大量生長活躍的成骨細胞、破骨細胞和骨細胞；膜管外見軟骨內(nèi)化骨和膜內(nèi)化骨，對照側(cè)4周時軟骨細胞萎縮、退變，缺損內(nèi)纖維組織成熟，不再有軟骨形成。術(shù)后8周管內(nèi)成骨廣泛，骨斷端生長的骨小梁明顯向血腫中心生長，骨髓組織越過斷端長入骨缺損處新生的骨小梁之間，12周時管內(nèi)近中央成骨活躍。膜管外邊緣處則

5、經(jīng)軟骨內(nèi)化骨和膜內(nèi)化骨兩種方式成骨，8周時成骨活動停止，12周時膜管外骨痂吸收縮小。 (3)VEGF免疫組織化學(xué)術(shù)后1周實驗側(cè)增生的骨內(nèi)膜、骨髓間質(zhì)細胞、骨端骨細胞和血管內(nèi)皮細胞陽性著色。對照側(cè)成纖維細胞和新生毛細血管內(nèi)皮細胞陽性表達，新生軟骨細胞著色淺；膜管外邊緣處成纖維細胞、增生的骨外膜細胞陽性表達。術(shù)后2周及4周，管內(nèi)組織細胞及對照側(cè)肥大軟骨細胞、成骨細胞和缺損處骨膜組織均呈強陽性染色；4周對照側(cè)軟骨細胞著色變淺；膜管外肥

6、大軟骨細胞陽性表達。術(shù)后6周，實驗側(cè)硅膠膜管內(nèi)破骨細胞、成骨細胞、擴大哈佛氏管內(nèi)新生骨細胞陽性表達較前減弱。對照側(cè)自6周以后表達陰性。術(shù)后8～12周，管內(nèi)骨痂成骨細胞、破骨細胞、管內(nèi)新生骨細胞仍有陽性表達；膜管外成骨細胞、破骨細胞、新生骨細胞和新生骨基質(zhì)在8周時VEGF表達弱陽性，12周時陰性表達。 結(jié)論： 1.在骨修復(fù)不同時期，不同部位骨痂組織內(nèi)間充質(zhì)細胞、成骨細胞、軟骨細胞等出現(xiàn)不同程度的VEGF表達，并且在膜引導(dǎo)下