新型引導(dǎo)骨組織再生屏障膜的早期體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:引導(dǎo)骨組織再生(Guided Bone Regeneration，GBR)技術(shù)在口腔領(lǐng)域的臨床應(yīng)用十分普遍，包括牙周科、頜面外科、種植等學(xué)科均有廣泛的應(yīng)用。該技術(shù)通過膜的屏障作用，將牙體及種植體周圍的軟硬組織機(jī)械性的分開，防止結(jié)締組織長(zhǎng)入，避免纖維組織占據(jù)骨缺損區(qū)，維持血凝塊的穩(wěn)定和腔隙的占據(jù)，最大程度地為再生骨組織提供足夠必要的空間和環(huán)境，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)修復(fù)骨缺損的目的。目前，Bio-Gide(R)屏障膜是引導(dǎo)骨組織再生膜臨床應(yīng)用的金

2、標(biāo)準(zhǔn)，其主要成分為Ⅰ、Ⅲ型豬真皮膠原的，具有良好的屏障作用，有利于其屏障下方的骨再生修復(fù)，但由于高昂的價(jià)格極大的限制了其臨床的普及應(yīng)用。因此研制一款屏障作用優(yōu)良，骨傳導(dǎo)性及骨誘導(dǎo)性良好且價(jià)格適中的國(guó)產(chǎn)化屏障膜具有重大的臨床意義，其市場(chǎng)應(yīng)用前景也十分樂觀。本實(shí)驗(yàn)中所評(píng)價(jià)的兩種GBR膜，是在清華大學(xué)所帶領(lǐng)的團(tuán)隊(duì)下自主研發(fā)的新型膠原膜，其中單層膜為純膠原膜，成分與Bio-Gide(R)相似，但為單層結(jié)構(gòu);雙層膜為復(fù)合膠原膜，整體膠原與羥基磷灰

3、石的比例為90％∶10％，其光滑層為純膠原層，粗糙層為礦化膠原層。本研究通過動(dòng)物體內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)該新型國(guó)產(chǎn)引導(dǎo)骨組織再生膠原膜的屏障作用，考察GBR膜屏障下的人工骨材料的早期成骨效果，力求獲得一種新型的引導(dǎo)骨組織再生膠原膜材料，并為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:選取2只健康、12-18月齡的Beagle犬作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。全麻狀態(tài)下，在所有實(shí)驗(yàn)犬的左側(cè)下頜第二前磨牙(P2)、第三前磨牙(P3)、第四前磨牙(P4)、以及第一磨牙

4、(M1)的頰側(cè)根分叉處，采用磨骨術(shù)，利用高速手機(jī)各制備一個(gè)大小為5mm×5mm×5mm的骨缺損，制備過程是在X光片的參照下進(jìn)行，避免損傷牙神經(jīng)。沖洗創(chuàng)面，在四個(gè)缺損中分別填入骼金(R)人工骨材料，P2缺損作為對(duì)照組不再做處理（A組）。于P3的骨充填材料表面覆蓋Bio-Gide(R)膠原屏障膜（B組），P4表面覆蓋單層膠原屏障膜（C組），M1表面覆蓋雙層膠原屏障膜（D組），之后縫合。四周后對(duì)兩只實(shí)驗(yàn)犬的右側(cè)下頜骨進(jìn)行相同的術(shù)式，處死前14

5、d、13d注射25mg/kg的茜紊紅，之前4d、3d注射20mg/kg的鈣黃綠素。于第一次實(shí)驗(yàn)八周后灌注處死收集標(biāo)本。通過大體觀察、X線檢查、骨組織熒光切片以及硬組織骨磨片Goldner's三色染色法，鏡下觀察并分析缺損區(qū)分別在4周和8周時(shí)的組織修復(fù)情況，同時(shí)借助統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算分析，以探討兩種新型屏障膜材料早期修復(fù)骨缺損的能力。
　　結(jié)果:術(shù)后Beagle犬無(wú)異常表現(xiàn)，無(wú)死亡，無(wú)炎癥反應(yīng)，口內(nèi)縫合處恢

6、復(fù)良好，牙周質(zhì)地色澤健康。X光顯示，4周時(shí)，對(duì)照組缺損區(qū)周圍可見新骨生成，骨白線模糊不清，中央部位可見明顯缺損影像。實(shí)驗(yàn)組之間區(qū)別并不明顯，新生骨的密度均低于原始骨質(zhì)。術(shù)后8周，實(shí)驗(yàn)組的X線表現(xiàn)為缺損處骨質(zhì)增生，可見骨密度較之4周升高，缺損區(qū)域均比對(duì)照組更小。熒光劑雙色標(biāo)記顯示，測(cè)得三組實(shí)驗(yàn)組以及一組對(duì)照組中，茜素紅及鈣黃綠素所成兩條熒光帶間的平均距離，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得到兩條熒光帶間的距離，最終求得平均礦化率(μm/d)。四周:A組:1.

7、2±0.329μm/d、B組:2.594±0.558μm/d、C組:1.267±0.304μm/d、D組:2.877±0.321μm/d;八周:A組:1.616±0.298μm/d、B組:4.1±0.85μm/d、C組:1.902±0.165μm/d、D組:3.582±0.376μm/d。經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)計(jì)算結(jié)果顯示，有屏障膜覆蓋的三個(gè)實(shí)驗(yàn)組成骨速率要高于對(duì)照組，A和B、A和D、C和D之間具有顯著性，顯著性P＜0.01;B和D、A和C之

8、間則沒有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Goldner's三色法染色骨磨片光學(xué)顯微鏡下觀察可見，實(shí)驗(yàn)組有分布較廣的骨小梁，骨質(zhì)豐富，骨小梁之間為大量且均勻分散的成骨細(xì)胞;對(duì)照組中包括編織骨及板層骨，成骨細(xì)胞較實(shí)驗(yàn)組稀疏，骨小梁分布廣泛且數(shù)量較少。
　　結(jié)論:在本實(shí)驗(yàn)條件下，單層膠原膜、雙層納米羥基磷灰石膠原復(fù)合膜均有較好的屏障作用，無(wú)纖維結(jié)締組織長(zhǎng)入。本實(shí)驗(yàn)條件下，人工骨材料的骨礦化沉積率（MAR）在雙層納米羥基磷灰石膠原復(fù)合膜組合與Bio-G