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文檔簡介
1、強直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis,AS)是一種常見的慢性炎癥性風濕性疾病。中軸骨骼的慢性炎癥和新骨形成是其標志性的病理學特點。近些年,隨著影像學技術和治療方面的改進與提高,已從根本上改變了該疾病的診斷和治療。但是,在抑制結構損傷方面還缺乏有效地藥物可供選擇。目前,傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥物依然是治療強直性脊柱炎的主要藥物之一。腫瘤壞死因子拮抗劑的應用,雖然在改善臨床癥狀和體征方面取得了前所未有的效果,但是,近幾年的
2、臨床隨訪研究并沒有發(fā)現(xiàn)它們能夠阻止新骨形成的進展。
起止點和關節(jié)軟骨損傷處是AS新骨形成的主要部位。病理學研究發(fā)現(xiàn),在這些部位中都存在大量的成纖維細胞異常增殖。因此,我們推測在AS新骨形成過程中,可能存在著成纖維細胞向成骨細胞的轉化。此外,在AS的滑膜組織中可以檢測到具有促進成骨性分化能力的因子表達,如轉化生長因子-β和骨形態(tài)發(fā)生蛋白等。因此,我們進一步推測AS滑膜細胞可能能夠一些促進成骨性分化的因子,進而促進成纖維細胞向
3、成骨細胞的轉化。
目的:
探討強直性脊柱炎髖關節(jié)韌帶來源的成纖維細胞的體外成骨能力,以及滑膜細胞培養(yǎng)上清液對其成骨分化的影響。
方法:
實驗所需標本分別來源于強直性脊柱炎和股骨頭無菌性壞死(Aseptic necrosis ofhead of femur,ANFH)患者的髖關節(jié)韌帶和滑膜組織。分別進行韌帶成纖維細胞和滑膜細胞原代培養(yǎng),同時收集第一代的滑膜細胞培養(yǎng)上清液。分別應用四種
4、不同的條件培養(yǎng)基對第三代的韌帶成纖維細胞進行誘導,即:OIM:骨誘導培養(yǎng)基(為含有2×10-8mmol/L地塞米松、0.1mg/ml維生素C、20mmol/Lβ-甘油磷酸鈉和10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基)+含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基;OIMBMP-2:骨誘導培養(yǎng)基+含有0.3ug/ml BMP-2的DMED/F12培養(yǎng)基;OIMANFH:骨誘導培養(yǎng)基+ANFH滑膜細胞培養(yǎng)上清液;OIMAS:骨誘導培養(yǎng)基+AS滑
5、膜細胞培養(yǎng)上清液。分別于誘導后的0、5、10、15和20天時,采用定量和定性的方法檢測堿性磷酸酶活力的變化。采用ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清液中骨鈣素的表達水平。采用Von Kossa染色方法檢測鈣結節(jié)的形成情況。
結果:
應用四種不同的條件培養(yǎng)基對韌帶成纖維細胞進行誘導后,堿性磷酸酶的活力和骨鈣素的表達水平隨著誘導時間的延長逐漸升高,其中堿性磷酸酶在第10天時明顯升高,第15天時達到高峰,骨鈣素在第15天
6、時明顯升高并達到高峰。在誘導培養(yǎng)的第20天時在各組細胞中均可檢測到有鈣結節(jié)形成。比較四種不同的條件培養(yǎng)基對韌帶來源的成纖維細胞的體外誘導成骨能力發(fā)現(xiàn),OIMBMP-2>>OIMAs>>OIMANFH>OIM,表現(xiàn)在堿性磷酸酶活力和骨鈣素表達量的高低,四個處理組之間相比較有統(tǒng)計學意義,P<0.05。比較AS韌帶成纖維細胞和ANFH韌帶成纖維細胞堿性磷酸酶活力和骨鈣素的表達水平,前者均高于后者,兩組比較有統(tǒng)計學意義,P<0.05。
7、 結論:
強直性脊柱炎髖關節(jié)韌帶來源的成纖維細胞在體外具有向成骨細胞轉化的能力,并且這種轉化能力強于對照組。強直性脊柱炎滑膜細胞培養(yǎng)上清液對韌帶成纖維細胞的成骨分化具有一定的促進作用,提示強直性脊柱炎滑膜細胞能夠分泌促進成骨分化的因子。
本課題研究證實了強直性脊柱炎髖關節(jié)韌帶來源的成纖維細胞在體外具有向成骨細胞轉化的能力,同時發(fā)現(xiàn)AS滑膜細胞培養(yǎng)上清液對韌帶成纖維細胞的成骨分化具有一定的促進作用。通過該研
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