小鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)體系二維法和三維法的比較.pdf

1、目的：比較小鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)體系二維法及三維法,通過觀察比較二維液滴法和三維海藻酸鈉明膠法體外卵泡的存活及生長情況、產(chǎn)生激素能力及卵母細胞成熟情況,來選擇優(yōu)化的小鼠腔前卵泡體外生長培養(yǎng)體系。
　　方法：經(jīng)機械法分離得到出生12-14天C57BL/6J小鼠的單個卵泡,選擇直徑在80-130μm的結(jié)構(gòu)完整的腔前卵泡,分別使用二維96孔板液滴法和三維96孔板海藻酸鈉明膠法體系進行體外培養(yǎng),在添加了10％血清、5.5mg/mlPNa、I

2、TS、5ng/mlEGF及100mIU r-FSH的a-MEM培養(yǎng)基中共培養(yǎng)7天。隔天1/2換液,并使用倒置顯微鏡及Image J軟件拍照并測量卵泡直徑,使用免疫熒光分析法檢測換液培養(yǎng)基的激素濃度。
　　結(jié)果：二維液滴法和三維海藻酸鈉明膠法兩體系中,卵泡的生存率及閉鎖率無統(tǒng)計學(xué)差異;二維液滴法中卵泡直徑增長速度快于三維海藻酸鈉明膠法體系,且差異從第3天開始出現(xiàn)(1.12±0.154:1.11±0.148),并逐漸增大至第7天的最大