活細(xì)胞中AT1R、B1R和B2R高階聚化的研究.pdf

1、腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-Angiotensin System，RAS）是血管張力和容量平衡調(diào)節(jié)的關(guān)鍵系統(tǒng)，與高血壓和充血性心力衰竭等心血管疾病有著密切關(guān)系。近年來血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）的研究擴(kuò)大了RAS系統(tǒng)在心血管系統(tǒng)以及其他系統(tǒng)中發(fā)揮的生物效應(yīng)， ACE2不僅能將血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ）分解成血管緊張素片段[1-7]，還能作用于激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)（Kallikrein-Kinin System，KK

2、S）的重要組分緩激肽。這些肽類都是通過相應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptors，GPCRs）發(fā)揮其生物學(xué)功能。最新研究發(fā)現(xiàn) GPCRs能以同源或異源二聚體，甚至是高階寡聚體的形式存在，這些形式有不同于單體的特定功能特征。本文探討人的血管緊張素Ⅱ1型受體（AngiotensinⅡ1 receptor，AT1R）和緩激肽1型受體（bradykinin receptor1，B1R）以及緩激肽2型受體（bra

3、dykinin receptor2，B2R）之間的相互作用。這些結(jié)果將為G蛋白偶聯(lián)受體高階聚化尤其是AT1R/B1R/B2R的異源三聚化的分子組成提供新的見解，并為探尋相關(guān)疾病發(fā)生的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　目前用于研究高階寡聚化的方法主要是多種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用，如順序性共振能量轉(zhuǎn)移（Sequential resonance energy transfer，SRET）技術(shù)、雙分子發(fā)光互補(bǔ)（Bimolecular luminesce

4、nce complementation，BiLC）聯(lián)合生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）技術(shù)、雙分子熒光互補(bǔ)（Bimolecular fluorescence complementation，BiFC）聯(lián)合生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）技術(shù)以及雙分子熒光互補(bǔ)（Bimolecular luminescence complementation，BiLC）聯(lián)合熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescenceresonance energy tran

5、sfer，F(xiàn)RET）技術(shù)等。本課題，我們首先成功構(gòu)建六個(gè)真核重組質(zhì)粒：NRlu-pcDNA3.1、CRlu-pcDNA3.1、Rluc-AT1R-pcDNA3.1、NRlu-AT1R-pcDNA3.1、CRlu-AT2R-pcDNA3.1和C Rlu-B2R-pcDNA3.1；然后利用BRET和BiLC技術(shù)研究AT1R與B1R、AT1R和B2R的異源二聚化；最后利用SRET和BiLC+BRE T技術(shù)研究AT1 R/B1 R/B2 R的異