煙草根系中NtWRKY-R15’UTR和NtNAC-R1功能研究.pdf

1、根系是主要的煙堿合成部位。研究發(fā)現(xiàn)，在煙株打頂后，煙草根系合成煙堿的能力增強(qiáng)。但調(diào)節(jié)機(jī)制并不清楚。為了研究煙株打頂誘導(dǎo)根系煙堿生物合成信號(hào)傳導(dǎo)的分子機(jī)制，我們從煙株打頂前后根尖組織的SSH-cDNA文庫中篩選并克隆得到的NtNAC-R1、NtWRKY-R1，以此為研究對(duì)象，探討這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因?qū)熤甏蝽敽笳T導(dǎo)根系煙堿合成能力過程中的作用。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.構(gòu)建了NtNAC-R1的干擾表達(dá)載體（RNAi）pFGC5941

2、-NtNAC-R1，轉(zhuǎn)化煙草K326，得到了F1代煙株。以移栽后30d的K326煙草品種為材料，以野生型為對(duì)照，以前期獲得的NtNAC-R1過表達(dá)轉(zhuǎn)化煙株和上述NtNAC-R1RNAi轉(zhuǎn)化煙株的F1代進(jìn)行qPCR檢測PMT、NtWRKY-R1、NtNAC-R1表達(dá)變化。結(jié)果顯示，NtNAC-R1過表達(dá)煙株中的PMT表達(dá)水平是對(duì)照的1.65倍，而NtNAC-R1RNAi煙株中的PMT表達(dá)水平是對(duì)照的0.27倍,表明NtNAC-R1參與了打

3、頂傷害誘導(dǎo)煙堿合成的過程；而NtNAC-R1過表達(dá)煙株中的NtWRKY-R1表達(dá)水平是對(duì)照的0.25倍，而NtNAC-R1RNAi煙株中的NtWRKY-R1表達(dá)水平是對(duì)照的0.17倍，表明NtNAC-R1對(duì)NtWRKY-R1表達(dá)沒有顯著影響。
　　2.構(gòu)建了NtWRKY-R1的5’UTR缺失載體，通過瞬時(shí)表達(dá)分析，結(jié)果顯示NtWRKY-R1的5’UTR對(duì)NtWRKY-R1的表達(dá)具有調(diào)控作用。
　　其結(jié)果為進(jìn)一步研究其在煙株打