小麥條銹菌生理小種RAPD體系優(yōu)化及CY32的SCAR標(biāo)記的建立.pdf

1、小麥條銹病是危害最嚴(yán)重的小麥流行性病害之一。由于條銹菌生理小種的變異，常常造成大面積推廣品種“喪失”抗銹性，導(dǎo)致條銹病的大流行。研究表明條銹菌新小種的產(chǎn)生和發(fā)展是引致小麥抗病性喪失的主要原因。因而，監(jiān)測小麥條銹菌生理小種的類型及小種組成的變化對于小麥條銹病的綜合防治及抗病品種的選育具有重要的實(shí)際意義。小麥條銹菌屬專性寄生菌，其遺傳特征十分復(fù)雜，至今未發(fā)現(xiàn)其有性世代，不能人工培養(yǎng)。常規(guī)的生理小種鑒定的方法繁雜、費(fèi)工費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性易受到鑒定條

2、件的影響；同時(shí)，由于鑒別寄主的數(shù)目相對有限，很難區(qū)分、鑒定出發(fā)生頻率低的小種(致病類型)以及混雜在其它小種內(nèi)的致病類型。這些都嚴(yán)重制約了條銹菌群體生物學(xué)的研究。 分子生物學(xué)的發(fā)展為監(jiān)測各地生理小種的組成及變異動(dòng)態(tài)提供了新的方法。鑒于小麥條銹菌是?；约纳?，尚未發(fā)現(xiàn)其有性階段，本文擬采用RAPD技術(shù)，通過揭示小麥條銹菌生理小種間及生理小種內(nèi)的遺傳多樣性，尋找主要流行小種的特異性分子標(biāo)記，從而為建立具有實(shí)用價(jià)值的中國小麥條銹菌生理

3、小種的快速分子檢測體系奠定基礎(chǔ)。本文取得了以下主要結(jié)果： 對小麥條銹菌的RAPD反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，建立了適用于小麥條銹菌的標(biāo)準(zhǔn)化RAPD反應(yīng)體系。多批次的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)證明該反應(yīng)體系的穩(wěn)定性好，重復(fù)性強(qiáng)。 選用了99條10堿基隨機(jī)引物，發(fā)現(xiàn)其中51條引物可以得到穩(wěn)定清晰的擴(kuò)增圖譜。對中國小麥條銹菌12個(gè)主要生理小種的單孢菌系進(jìn)行的RAPD分析表明：中國小麥條銹菌各生理小種間的遺傳變異豐富，但一些基因組區(qū)段仍具有一定的保守性。

4、而生理小種內(nèi)不同單孢分離系間沒有RAPD譜型的差異，生理小種內(nèi)的遺傳基礎(chǔ)相對一致。 尋找到了條中32號的特異性RAPD標(biāo)記，并進(jìn)行了單孢菌系的驗(yàn)證。通過對條中32號特異RAPD片段的回收、克隆和測序，設(shè)計(jì)了兩對特異PCR引物，成功獲得條中32號小種?；腟CAR標(biāo)記。 上述結(jié)果表明通過大規(guī)模尋找小麥條銹菌生理小種的特異性RAPD片段，可以建立起中國小麥條銹菌流行生理小種的分子鑒定、檢測體系，簡化常規(guī)鑒定的繁瑣程序，縮短鑒