獼猴桃種質(zhì)資源RAPD分析及芽變SCAR標(biāo)記研究.pdf

1、　　本文以獼猴桃10個(gè)種、34個(gè)栽培品種共42個(gè)生物型的葉片為試驗(yàn)材料，采用改良CTAB法提取基因組DNA，對(duì)獼猴桃各生物型遺傳變異進(jìn)行研究。試驗(yàn)對(duì)RAPD反應(yīng)中的Taq酶濃度、模板DNA濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度及隨機(jī)引物濃度進(jìn)行了逐個(gè)優(yōu)化，建立了獼猴桃基因組RAPD分析的最佳反應(yīng)體系。即總反應(yīng)體積20μL，Taq酶1.0U、模板DNA80ng、MgCl21.25mmol·L-1、dNTPs0.25mmol·L-1，引物1.0

2、ng·μL-1。PCR熱循環(huán)參數(shù)為94℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，37℃退火1min，72℃延伸2min，循環(huán)40次；最后在72℃延伸6min?！　【垲惙治鼋Y(jié)果顯示，中華獼猴桃“武植2號(hào)”和美味獼猴桃“啞特”在距離系數(shù)為46.0時(shí)聚為一類，說(shuō)明美味獼猴桃和中華獼猴桃親緣關(guān)系較近；美味獼猴桃品種“米良1號(hào)”、“青城1號(hào)”和絕大多數(shù)中華獼猴桃品種聚類距離系數(shù)為96.4，所有的美味獼猴桃和中華獼猴桃品種聚類距離系數(shù)為104.5，且

3、聚類的先后秩序有交叉現(xiàn)象。因此，根據(jù)RAPD分析結(jié)果，認(rèn)為將這兩個(gè)種歸為同一個(gè)種更為合理；“川獼1號(hào)”和“川獼2號(hào)”、“徐香”和“徐冠”、“華美1號(hào)”和“華美2號(hào)”、“武植2號(hào)”和“武植3號(hào)”都分別在較近的距離水平上聚在一起，說(shuō)明獼猴桃品種之間確有按原產(chǎn)地聚類的趨勢(shì)?！　「鶕?jù)獼猴桃基因組DNA的RAPD分析，構(gòu)建了特異帶DNA指紋圖譜，利用這一圖譜，可將獼猴桃42個(gè)生物型中的12個(gè)生物型區(qū)別開來(lái)。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，“海沃德”與“皖翠”在

4、38個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增中，有14個(gè)引物出現(xiàn)了18條特異帶，說(shuō)明“皖翠”在DNA水平上呈現(xiàn)了較大范圍的的變異?！　摹昂Ｎ值隆迸c“皖翠”的18條特異帶中，選擇了兩條分子量分別為740bp、649bp的特異帶，進(jìn)行了分離、純化、克隆與測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)出4條20bp的特異引物，再進(jìn)行SCAR-PCR擴(kuò)增?！　CAR-PCR擴(kuò)增結(jié)果，分子量為649bp的特異帶在“皖翠”與“海沃德”中都擴(kuò)增出了條帶，說(shuō)明“皖翠”這－RAPD擴(kuò)增特異帶并不