子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體TrkA、p75的表達(dá)和患者疼痛的關(guān)系.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是一種婦科常見(jiàn)病，好發(fā)于育齡婦女的雌激素依賴性疾病，常表現(xiàn)為慢性盆腔痛/痛經(jīng)和不孕，其中疼痛是EMs的特征性臨床癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。EMs按病灶分布、臨床表現(xiàn)、處理及預(yù)后的不同將其分為腹膜型(PeritonealEndometriosis，PEM)、卵巢型(OvarianEndometiosis，OEM)、深部浸潤(rùn)型(DeepInfiltratingEndometriosis

2、，DIE)及其他部位(OtherEndometriosis，OtEM)4種類型。雖然這四種類型均能引起不同類型及不同程度的臨床疼痛癥狀，但深部浸潤(rùn)型相關(guān)的疼痛最明顯，因此，目前對(duì)深部浸潤(rùn)型相關(guān)疼痛的研究報(bào)道較多，但是關(guān)于子宮內(nèi)膜異位癥的疼痛機(jī)制至今尚不清楚。
　　 EMs患者所致的疼痛目前認(rèn)為可能與局部前列腺素增高、炎癥性細(xì)胞因子異常以及異位病灶機(jī)械性牽拉等因素有關(guān)，但明確的發(fā)病機(jī)制至今仍不清楚。近年研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子通過(guò)與

3、神經(jīng)細(xì)胞受體的結(jié)合，實(shí)現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞的增殖、分化，在誘導(dǎo)神經(jīng)肽的同時(shí)增加感覺(jué)神經(jīng)元的數(shù)量，對(duì)EMs的疼痛及痛覺(jué)過(guò)敏的發(fā)生有重要影響。
　　 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nervegrowthfactor，NGF)是一種具有神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)和促神經(jīng)突起生長(zhǎng)雙重生物學(xué)功能的神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，對(duì)中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長(zhǎng)、再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的調(diào)控作用。NGF包含α，β和γ三個(gè)亞單位，活性區(qū)是β亞單位，由兩個(gè)118個(gè)氨基酸組成的單鏈通過(guò)

4、非共價(jià)鍵結(jié)合而成的二聚體。其主要分布于腦、神經(jīng)節(jié)、虹膜、心臟、脾、胎盤(pán)等組織及成纖維細(xì)胞、平滑肌、骨骼肌、膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺細(xì)胞等部位。NGF有兩種受體，高親和力受體(TrkA受體)和低親和力受體(p75受體)。TrkA由3部分組成：即辨別并結(jié)合NGF的細(xì)胞外部、跨膜部及含酪氨酸激酶的胞質(zhì)部。TrkA是NGF的功能性受體，當(dāng)其與NGF結(jié)合后，可激活酪氨酸激酶信號(hào)傳遞系統(tǒng)，從而啟動(dòng)細(xì)胞活性，產(chǎn)生生物效應(yīng)。p75受體是由400個(gè)氨基酸構(gòu)成的膜蛋

5、白，屬于腫瘤壞死因子家族?？稍黾覶rkA酪氨酸激酶活力，從而產(chǎn)生信號(hào)傳遞，最終提高自由基清除劑，如過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化酶等活性，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)Na+/K+、改變興奮性氨基酸(EAAs)受體NMDA對(duì)EAAs的反應(yīng)性，緩解EAAs的毒性，保持細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平的穩(wěn)定。NGF的作用機(jī)制為與受體結(jié)合，通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞機(jī)制，形成由軸膜包繞、含有NGF、并保持其生物活性的小泡，經(jīng)軸突沿微管逆轉(zhuǎn)運(yùn)至胞體，經(jīng)酪氨酸蛋白激酶、脂酰肌

6、醇鈣、內(nèi)源性環(huán)腺苷酸等第二信使體系的轉(zhuǎn)導(dǎo)，啟動(dòng)一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，對(duì)靶細(xì)胞的某些結(jié)構(gòu)或功能蛋白基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控而發(fā)揮其生物效應(yīng)。
　　 NGF及其受體p75和TrkA是否涉及EMs的發(fā)病和疼痛機(jī)制長(zhǎng)期未受關(guān)注。最近，Tokushige等應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)EMs腹膜異位病灶中NGF和NGFRp75的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹膜異位病灶NGF和NGFRp75的表達(dá)顯著高于正常腹膜，提示，NGF和NGFRp75可能參與EMs的發(fā)病。同樣也有

7、研究發(fā)現(xiàn)，EMs患者不同類型的異位病灶均有NGF的高表達(dá)，且與患者疼痛癥狀的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，但NGF的特異性受體(TrkA)卻不在EMs異位病灶中表達(dá)，而在臨近異位病灶的神經(jīng)纖維包括腹下神經(jīng)和卵巢神經(jīng)上表達(dá)。提示TrkA更可能涉及EMs患者的疼痛癥狀。迄今為止尚有一些未知內(nèi)容：NGF及其受體在非EMs在位子官內(nèi)膜、EMs在位內(nèi)膜中表達(dá)情況，在疼痛和無(wú)疼痛EMs患者內(nèi)異病灶中的表達(dá)差別，在其他部位：如腹壁子宮內(nèi)膜異位結(jié)節(jié)(Abdomin

8、alEndometriosisNode，AEM)的表達(dá)情況，仍需進(jìn)一步研究。
　　 基于以上的研究背景，我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)，采用NGF及其受體TrkA及p75作為檢測(cè)指標(biāo)來(lái)檢測(cè)各種EMs病灶中的表達(dá)，旨在探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病和疼痛機(jī)制中的作用，為臨床研究EMs疼痛發(fā)生機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 研究目的：
　　 通過(guò)對(duì)疼痛和無(wú)疼痛的以及不同類型的子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜病灶中神經(jīng)

9、生長(zhǎng)因子(NGF)及受體(TrkA和p75)的表達(dá)，探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體與子宮內(nèi)膜異位癥患者疼痛之間的關(guān)系。
　　 材料和方法：
　　 1、研究對(duì)象：選擇2008年6月至2011年6月就診于浙江大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院或杭州市第一人民醫(yī)院住院手術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥的患者97例，其中(DIE35例，OEM42例，腹壁內(nèi)異結(jié)節(jié)20例)，對(duì)照組為同期在杭州市第一人民醫(yī)院住院手術(shù)并經(jīng)病理確診為子宮肌瘤且不伴疼痛患者的正常

10、子宮內(nèi)膜組織和正常宮骶韌帶組織。
　　 2、研究方法
　　 2.1、神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體的檢測(cè)
　　 應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)NGF、TrkA及p75在子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶以及在位內(nèi)膜中的表達(dá)。
　　 2.2、采用視覺(jué)模擬(VAS)評(píng)分方法給EMs組患者進(jìn)行術(shù)前疼痛評(píng)分?；镜姆椒ㄊ鞘褂靡粭l長(zhǎng)約10cm的游動(dòng)標(biāo)尺，一面標(biāo)有10個(gè)刻度，兩端分別“0”分端和“10”分端，“0”分表示無(wú)痛，“10”分代表難以忍受的

11、最劇烈的疼痛，臨床使用時(shí)將有刻度的一面背向病人，讓病人在直尺上標(biāo)出能代表自己疼痛程度的相應(yīng)位置，醫(yī)師根據(jù)病人標(biāo)出的位置為其評(píng)出分?jǐn)?shù)。選擇“10”或者“0”分的病例。
　　 3、統(tǒng)計(jì)方法
　　 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每組H-SCORES的結(jié)果采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組蛋白表達(dá)的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有顯著性。
　　 結(jié)果：
　　 1、DIE病灶中NGF、TrkA及p

12、75的表達(dá)顯著高于正常官骶韌帶組織(p<0.05)，而DIE疼痛患者組僅p75的表達(dá)高于DIE無(wú)疼痛患者組(p<0.05)。
　　 2、EMs患者在位內(nèi)膜中NGF、TrkA及p75的表達(dá)顯著高于非EMs子宮內(nèi)膜(p<0.05)，但EMs疼痛患者組在位內(nèi)膜僅p75的表達(dá)顯著高于EMs無(wú)疼痛組(p<0.05)。
　　 3、NGF及TrkA表達(dá)于卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的血管上皮及其間質(zhì)內(nèi)，疼痛組與非疼痛組之間無(wú)明顯差異(p>0.

13、05)，而p75僅表達(dá)在疼痛患者子宮內(nèi)膜異位囊腫的間質(zhì)內(nèi)，顯著高于無(wú)疼痛組的表達(dá)，兩組之間具有顯著性差異(p<0.05)。
　　 4、EMs患者病灶內(nèi)的NGF的表達(dá)量依次為：DIE>OEM>AEM(p<0.05)。TrkA在三組中未見(jiàn)明顯差異(p>0.05)。p75在DIE中表達(dá)量最高(p<0.05)，其他兩組間未見(jiàn)明顯差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、DIE病灶中NGF、TrkA及p75的表達(dá)顯著

14、高于正常宮骶韌帶組織，以及EMs患者在位內(nèi)膜NGF、TrkA及p75的表達(dá)顯著高于非EMs在位子宮內(nèi)膜，提示NGF及其受體TrkA及p75可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展。
　　 2、DIE疼痛患者組、內(nèi)異疼痛組的在位內(nèi)膜和卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫疼痛組，在本課題研究指標(biāo)中，均僅有p75的表達(dá)高于相對(duì)應(yīng)的無(wú)疼痛患者組，提示p75在EMs疼痛機(jī)制研究中可能是個(gè)較好的指標(biāo)，其可能參與了疼痛的發(fā)生。
　　 3、DIE病灶中NG