妊娠相關(guān)血漿蛋白A（PAPP-A）和游離雌三醇（uE-,3-）時(shí)間分辨熒光免疫診斷試劑盒的研制.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文妊娠相關(guān)血漿蛋白A（PAPPA）和游離雌三醇（uE）時(shí)間分辨熒光免疫診斷試劑盒的研制姓名：蔣藝勤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：吳英松20070320摘要無污染等特點(diǎn)，并廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。它主要利用了標(biāo)記物Eu”獨(dú)特的熒光特性，通過時(shí)『白J延遲和波長分辨技術(shù)，使得強(qiáng)特異性熒光和背景熒光分辨開，從而消除了背景熒光的干擾，提高檢測靈敏度。妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPPA)是一種鋅離子依賴性金

2、屬蛋白酶，它是在1974年首次在妊娠婦女血中發(fā)現(xiàn)。它的分子量為199kDa，基因編碼在第9號染色體。目前普遍認(rèn)為PAPPA是孕婦血清學(xué)產(chǎn)Iji『篩查的一項(xiàng)重要塵化指標(biāo)，主要用于妊娠早期(第1期)產(chǎn)前篩查和動脈硬化方面的研究。如果孕婦814周時(shí)，PAPP—A水平較低，犯胎兒發(fā)育不良、染色體異常、早產(chǎn)和死胎等風(fēng)險(xiǎn)增加。n廿PA也可以作為急性冠狀動脈綜合征(包括動脈粥樣硬化、急性心肌梗塞、不穩(wěn)定心絞痛等)的一種新的生化血清學(xué)指標(biāo)。雌三醇(E3

3、)是3種重要的內(nèi)源性雌性激素之一，在正常人血清樣品中的含量很低，女性體內(nèi)雌激素水平隨月經(jīng)周期呈現(xiàn)周期性變化；對于孕婦，它的主要來源是嬰兒和胎盤，且一般含量很高(超過10ng／mL)。首先，來自母親的類固醇在胎盤轉(zhuǎn)化為孕酮，孕酮在胎兒腎上腺再轉(zhuǎn)為DHEAS，然后在胎兒肝中羥基化，最后在胎盤轉(zhuǎn)化E3。在非妊娠婦女，它主要來源雌二醇(E2)。在體內(nèi)，uEs約占9％，結(jié)合雌三酵(cE3)占91％。E3在體內(nèi)半衰期為(2030)分鐘。總雌三醇(r

4、E3)的改變能引起uE3的迅速改變。測定uE3LLI預(yù)fJtE3有更多有優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)閡E3的水平不受肝病和母親的腎臟影響，也不受抗生素的影響。它更能準(zhǔn)確的反應(yīng)胎兒發(fā)育的情況，況且uE3也更易于檢測。目的：在建立PAPPA雙抗體夾心和uE3的競爭抑制時(shí)間分辨熒光免疫分析法的基礎(chǔ)上，研制其TRFIA定量診斷試劑，并與市售的PerkinElmer(以下簡稱PE)公司時(shí)間分辨免疫測定試劑盒進(jìn)行比較。方法：采用固相雙位點(diǎn)抗體夾心法(一株單克隆抗體用