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1、目的:構(gòu)建日本血吸蟲(chóng)Sj14FABP和Sj26GST膜錨定共表達(dá)質(zhì)粒pIRES-Sj26-Sj14,并檢測(cè)其在體外的表達(dá)。 方法:利用RT-PCR法,以日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)總RNA為模板,擴(kuò)增獲得Sj14FABP與Sj26GST的全長(zhǎng)基因。并先將其克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pVAC中,分別獲得重組質(zhì)粒pVAC-Sj14、pVAC-Sj26。然后分別以pVAC-Sj14、pVAC-Sj26質(zhì)粒為模板,采用PCR技術(shù)擴(kuò)增出含人白介素2(IL-2)
2、23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽與人胎盤(pán)堿性磷酸酶(PLAP)COOH-末端32個(gè)氨基酸的膜錨定序列在內(nèi)的Sj14、Sj26修飾基因。并將該兩個(gè)修飾基因共同構(gòu)建到真核表達(dá)載體pIRES上獲得共表達(dá)質(zhì)粒pIRES-Sj26-Sj14,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,通過(guò)RT-PCR的方法及間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Sj26,Sj14基因的膜錨定表達(dá)。 結(jié)果:經(jīng)過(guò)酶切鑒定、PCR、測(cè)序證實(shí)所克隆的Sj14FABP、Sj26GST基因與報(bào)道結(jié)果完全一致,重
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