構(gòu)建日本血吸蟲抗原Sj23的畢赤酵母和轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿表達(dá)系統(tǒng).pdf

1、日本血吸蟲病是一種嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲病，具有感染率高，復(fù)發(fā)性強(qiáng)等特點。目前對血吸蟲疾病的預(yù)防和治療主要是通過消滅釘螺和藥物吡喹酮化療來實現(xiàn)的，但效果并不是很理想。當(dāng)今疫苗已成為控制和治療傳染病的一種有力武器，因此高效、廉價的日本血吸蟲疫苗的研制具有很強(qiáng)的經(jīng)濟(jì)價值和社會意義。畢赤酵母和轉(zhuǎn)基因植物作為真核表達(dá)系統(tǒng)，用于生產(chǎn)疫苗均具有廉價、安全和有效等優(yōu)點，已成為目前研究的熱點。本實驗通過分子生物學(xué)手段，分別建立了Sj23 抗原基因的畢

2、赤酵母和紫花苜蓿表達(dá)系統(tǒng)，以期望獲得日本血吸蟲蛋白質(zhì)疫苗和可食用性植物疫苗。目前已取得了如下成果：
　　 (1)通過PCR 擴(kuò)增獲得Sj23基因，構(gòu)建了酵母表達(dá)載體pPIC9K-Sj23，對其進(jìn)行了雙酶切和測序驗證，測序結(jié)果與登錄號為M63706的日本血吸蟲抗原基因序列同源性為99%，表明已成功構(gòu)建酵母表達(dá)載體pPIC9K-Sj23。
　　 (2)通過LiCl法將重組酵母表達(dá)載體pPIC9K-Sj23轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS1

3、15中，獲得轉(zhuǎn)化子。對所得陽性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行PCR 篩選，得到酵母重組菌株。將得到的酵母重組菌株進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)，發(fā)酵表達(dá)Sj23 蛋白。取發(fā)酵上清進(jìn)行SDS-PAGE 分析，可獲得Sj23表達(dá)的23KDa 蛋白質(zhì)條帶，表明Sj23基因已成功轉(zhuǎn)入畢赤酵母中并可表達(dá)。
　　 (3)在搖瓶水平上，對重組菌株誘導(dǎo)發(fā)酵條件進(jìn)行了初步優(yōu)化，得出以1.0%甲醇為誘導(dǎo)物，在30℃培養(yǎng)時的最適誘導(dǎo)時間為72 h，最適誘導(dǎo)pH 為5.0。