rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸蟲病的診斷價值.pdf

1、目的：
　　 探討 rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸蟲病的免疫診斷價值；研究PCR或RT-PCR擴增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原編碼基因用于急性日本血吸蟲病的基因診斷價值。
　　 方法：
　　 將本室保存的pET28α-Sj26-Sj32重組質(zhì)粒在大腸埃希菌BL21(DE3)中誘導表達并經(jīng)大量培養(yǎng)后獲得菌液，根據(jù)Ni-NTA純化試劑盒說明進行操作獲得rSj26-Sj32融合蛋白，并利用SD

2、S-PAGE電泳和Westren-blot鑒定。將純化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸蟲成蟲抗原(SjAWA)分別建立酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、斑點酶聯(lián)免疫吸附試驗(Dot-ELISA)和Dipstick等方法檢測急性日本血吸蟲病患者血清中IgG或IgM抗體，并以華支睪吸蟲病、衛(wèi)氏并殖吸蟲病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺結(jié)核患者以及健康人血清作對照。
　　 分別從急性日本血吸蟲病患者血清中提取DNA或總

3、RNA，利用PCR或RT-PCR方法擴增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原編碼基因，用1.2％瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定，同時以華支睪吸蟲病患者血清、衛(wèi)氏并殖吸蟲病患者血清和正常人血清作為對照。
　　 結(jié)果：
　　 成功獲得rSj26-Sj32融合蛋白；rSj26-Sj32-IgM-ELISA檢測急性日本血吸蟲病患者血清特異性IgM抗體的敏感性和特異性分別為98.00%和97.67%，SjAWA的敏感性和特異性分別為9

4、6.00%和97.67%。SjAWA檢測華支睪吸蟲病和衛(wèi)氏并殖吸蟲病患者血清時存在不同程度的交叉反應，而rSj26-Sj32-IgM-ELISA則未見交叉反應。
　　 rSj26-Sj32-IgG-ELISA檢測急性日本血吸蟲病患者的敏感性和特異性分別為90.00%和97.67%，SjAWA-IgG-ELISA分別為92.00%和97.67%；SjAWA-IgG-ELISA與泡型棘球蚴病患者血清的交叉反應率為20.00%，而rS

5、j26-Sj32-IgG-ELISA未見交叉反應。
　　 rSj26-Sj32-HRP-IgG-Dot-ELISA檢測急性日本血吸蟲病患者的敏感性和特異性分別為100.00%和95.35%，SjAWA的敏感性和特異性分別為100.00%和93.02%；二者均與華支睪吸蟲病、衛(wèi)氏并殖吸蟲病和泡型棘球蚴病患者血清存在不同程度的交叉反應。
　　 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA檢測急性日本

6、血吸蟲病患者的敏感性和特異性分別為100.00%和97.67%，SjAWA的敏感性和特異性分別為100.00%和95.35%；SjAWA與華支睪吸蟲病和衛(wèi)氏并殖吸蟲病血清均存在不同程度的交叉反應，rSj26-Sj32則未見交叉反應。
　　 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dipstick法檢測急性日本血吸蟲病患者血清的敏感性和特異性分別為96.00%和97.67%；SjAWA檢測的敏感性和特異性分別為98.0

7、0%和95.35%。SjAWA-Immunogold-IgGDipstick法與華支睪吸蟲病、衛(wèi)氏并殖吸蟲病和泡型棘球蚴病患者血清存在不同程度的交叉反應，而rSj26-Sj32則未見交叉反應。
　　 50份急性日本血吸蟲病血清通過PCR或RT-PCR均擴增出了400bp的Sj14-3-3抗原編碼基因片段，但未擴增出676bp的Sj26或1270bp的Sj32抗原編碼基因片段：對照組呈陰性反應。PCR或RT-PCR擴增Sj14-3