枯草芽孢桿菌堿性蛋白酶抗煙草花葉病毒活性及其酶學(xué)性質(zhì)的初步研究.pdf

1、堿性蛋白酶(Alkaline Protease)是指在pH為堿性的條件下水解蛋白質(zhì)肽鍵的酶類，是一種廣譜性的蛋白水解酶，且來源廣泛。由微生物法獲得堿性蛋白酶成本低、產(chǎn)量高，方法科學(xué)可行。本研究旨在利用堿性蛋白酶降解煙草花葉病毒(TMV)外殼蛋白從而達(dá)到防治煙草花葉病的目的，為植物病毒病的防治提供一條嶄新而有效的途徑。論文從產(chǎn)堿性蛋白酶枯草芽孢桿菌的篩選、堿性蛋白酶的分離純化、堿性蛋白酶抗TMV活性及其酶學(xué)性質(zhì)等方面進(jìn)行研究，主要研究結(jié)果

2、如下： (1)從實(shí)驗(yàn)室已保存的4株枯草芽孢桿菌中，篩選出一株產(chǎn)高活性堿性蛋白酶的枯草芽孢桿菌W-QX-1。 (2)對(duì)菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行了研究，分別試驗(yàn)了起始pH和裝液量對(duì)發(fā)酵產(chǎn)酶的影響，繪制了發(fā)酵過程曲線。確定其最適發(fā)酵條件為：發(fā)酵起始pH為8.0，裝液量為20mL/250mL，發(fā)酵周期為36h。 (3)菌株W-QX-1的發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨鹽析、透析及非變性電泳分離得到純的堿性蛋白酶，SDS-PAGE測(cè)得其相對(duì)分子質(zhì)

3、量為42400。 (4)采用半葉枯斑法在心葉煙上檢測(cè)W-QX-1堿性蛋白酶抗TMV活性，發(fā)現(xiàn)該酶對(duì)TMV具有明顯的體外鈍化作用，酶液濃度為20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L時(shí)，其鈍化效果分別達(dá)到45.20％、53.40％、60.42％和76.73％1該酶對(duì)TMV的初侵染和體內(nèi)復(fù)制增殖具有一定的抑制能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在TMV侵染前24h施用濃度為200mg/L堿性蛋白酶液抑制其侵染力的效果達(dá)到50.35％，

4、而在TMV侵染后施用也具有一定的抑制其復(fù)制增殖的作用，但效果并不明顯。 (5)以酪蛋白為底物，對(duì)菌株W-QX-1產(chǎn)堿性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。該酶的最適作用溫度為50℃左右，在硼酸一硼砂緩沖液中的最適作用pH為7.8，在Tris-HCl緩沖液中的最適作用pH為8.0，在pH6～10范圍內(nèi)，45℃以下酶的穩(wěn)定性較好。Ca2+、K+、Mg2+對(duì)酶都有一定的激活作用，而Cu2+、Ag+則能抑制酶活；EDTA對(duì)該酶顯示出較強(qiáng)的抑制作用