三氯乙烯染毒對(duì)小鼠體內(nèi)Th1-Th2和Th17-Treg細(xì)胞平衡影響的研究.pdf

1、背景：
　　三氯乙烯（Trichloroehtylene，TCE）是一種廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的高分子有機(jī)化合物，其主要用途是在工廠(chǎng)中作為金屬、電子元件的清洗劑和脫脂劑等。隨著TCE接觸人群的不斷增加，以及近幾年工業(yè)生產(chǎn)中對(duì)TCE的使用不合理，以及對(duì)其管理不當(dāng)，使得TCE已經(jīng)嚴(yán)重污染了生活的環(huán)境，例如空氣污染、飲用水污染和土壤污染等，TCE已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外危害嚴(yán)重的職業(yè)毒物和環(huán)境污染物。職業(yè)性三氯乙烯暴露能夠?qū)е侣殬I(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎

2、（Occupational Dermatitis Medicamentosa-like of Trichloroethylene，ODMLT），現(xiàn)今大多認(rèn)為ODMLT是一種由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，但是其損傷機(jī)制不能單一的用TCE致敏性來(lái)解釋。與其他化學(xué)致敏物相比，TCE引起的機(jī)體免疫反應(yīng)更為強(qiáng)烈，提示TCE在具有致敏性之外，還具有免疫毒性。Th1/Th2/Th17/Treg平衡是機(jī)體內(nèi)免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要平衡，能夠有效地調(diào)節(jié)免

3、疫防御反應(yīng)，與免疫性疾病關(guān)系密切。
　　目的：
　　本研究通過(guò)對(duì)不同組別以及時(shí)點(diǎn) TCE染毒小鼠脾臟中Th1，Th2，Th17和Treg細(xì)胞比例，各自特異性表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子（T-bet、GTAT-3、ROR-γt、Foxp3）及分泌的細(xì)胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10），探討 TCE暴露對(duì)小鼠Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞平衡的影響，研究三氯乙烯藥疹樣皮炎的免疫機(jī)制。
　　方法：
　　選

4、取6-8周清潔級(jí)健康BALB/c雌性小鼠100只，水食充足，飼養(yǎng)一周時(shí)間，然后隨機(jī)分為：空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、TCE低劑量組和TCE高劑量組。采用飲水暴露的方法，空白對(duì)照組不作任何處理，溶劑對(duì)照組喂以1％二甲基亞砜（DMSO），TCE低劑量組與TCE高劑量的濃度分別為2.5mg/ml和5.0mg/ml（TCE用1%DMSO助溶）。TCE染毒后，分別在2、4、8、12、16周五個(gè)時(shí)點(diǎn)處死小鼠，收集小鼠全血，無(wú)菌取小鼠脾臟組織。采用流式細(xì)

5、胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠脾臟中Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞比例。采用免疫組化的方法檢測(cè)各組小鼠脾臟中IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-10細(xì)胞因子的表達(dá)。采用熒光定量 PCR檢測(cè)細(xì)胞特異性核轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GTAT-3、ROR-γt和Foxp3 mRNA表達(dá)水平。采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-10的含量。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠臟器系數(shù)結(jié)果
　　在整個(gè)實(shí)

6、驗(yàn)過(guò)程中，小鼠狀態(tài)良好，未出現(xiàn)染毒死亡狀態(tài)。臟器系數(shù)結(jié)果顯示：溶劑對(duì)照組與空白對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與溶劑對(duì)照組相比，TCE低劑量組小鼠的臟器系數(shù)無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。TCE高劑量組中，2、12、16周時(shí)，脾臟系數(shù)無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在4W與8W時(shí)，小鼠的脾臟系數(shù)顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.脾臟組織中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4

7、、IL-17和IL-10的表達(dá)情況
　　檢測(cè)小鼠小鼠脾臟中IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-10細(xì)胞因子的表達(dá)，免疫組化結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比，溶劑對(duì)照組中各細(xì)胞因子表達(dá)水平無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在TCE低劑量組中，在4、8、12周時(shí)，IFN-γ和IL-4的表達(dá)水平顯著升高，IL-10的表達(dá)水平顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而IL-17在各時(shí)間點(diǎn)均呈顯著升高趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義（P<0.05）。在TCE高劑量組中，IFN-γ在4、8、12周時(shí)表達(dá)水平顯著升高，IL-4在2、4、8、12周時(shí)表達(dá)水平明顯增高，而IL-17與IL-10的表達(dá)水平在各時(shí)點(diǎn)均顯著變化，IL-17顯著升高而IL-10顯著下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并且其改變趨勢(shì)較TCE低劑量組更為明顯。
　　3.脾臟組織中Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞比例結(jié)果
　　用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠脾臟Th1、Th2、Th17和

9、Treg細(xì)胞比例，結(jié)果顯示：溶劑對(duì)照組與空白對(duì)照組相比，各細(xì)胞比例無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在TCE低劑量組中，Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞比例于溶劑對(duì)照組相比均發(fā)生了顯著改變，其中Th2和Th17細(xì)胞比例顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；Th1細(xì)胞在2、4、8、12周時(shí)，比例均出現(xiàn)明顯上升情況，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Treg細(xì)胞比例顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在

10、TCE高劑量組中，各細(xì)胞比例的也發(fā)生了顯著改變，而且改變趨勢(shì)較低劑量組更為明顯，Th1、Th2和Th17細(xì)胞比例在個(gè)時(shí)間點(diǎn)均呈上升趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Treg細(xì)胞比例在各時(shí)間點(diǎn)均顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.脾臟組織中Th1/Th2/Th17/Treg平衡改變結(jié)果
　　Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞平衡的結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比，溶劑對(duì)照組無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

11、（P>0.05）。TCE處理組與溶劑對(duì)照組相比，Th1/Th2比例明顯下降而Th17/Treg比例明顯上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且高劑量組比低劑量組的改變趨勢(shì)更為明顯。
　　5.脾臟組織中核轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GTAT-3、ROR-γt和Foxp3 mRNA表達(dá)水平
　　熒光定量PCR結(jié)果顯示：溶劑對(duì)照組中的各核轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在TCE低劑量組中

12、，T-bet和ROR-γt分別在4、8、12周時(shí)表達(dá)水平有顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；GATA-3在2、4、8、12周時(shí)的表達(dá)水平有明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而在8、12周時(shí)，F(xiàn)oxp3的表達(dá)水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在TCE高劑量組中，T-bet的表達(dá)水平與低劑量組相同，在4、8、12周時(shí)顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；GATA-3在各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平有明顯增

13、高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ROR-γt和Foxp3在4、8、12、16周時(shí)的表達(dá)水平均有顯著改變，ROR-γt顯著升高而Foxp3顯著下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　6.脾臟組織中T-bet/GTAT-3/ROR-γt/Foxp3比例的結(jié)果
　　結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比，溶劑對(duì)照組中T-bet/GTAT-3與ROR-γt/Foxp3無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。TCE處理組與

14、溶劑對(duì)照組相比，T-bet/GTAT-3比例在中各時(shí)間點(diǎn)均顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ROR-γt/Foxp3比例在4、8、12、16周時(shí)均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并且其下降的趨勢(shì)在TCE高劑量組中更為明顯。
　　結(jié)論：
　　1、TCE具有免疫毒性，通過(guò)染毒后能夠改變小鼠免疫臟器中Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞的數(shù)量比例。
　　2、染毒過(guò)程中TCE引起小鼠體內(nèi) Th1/T