三氯乙烯經皮致敏對小鼠Th17細胞影響的研究.pdf

1、目的：通過檢測和比較不同組別和不同時點三氯乙烯經皮致敏小鼠體內Th17細胞的數量、其分泌的細胞因子IL-17和促Th17細胞產生的細胞因子IL-6表達情況,探討Th17細胞及相關細胞因子在TCE致敏中的作用,研究三氯乙烯藥疹樣皮炎皮膚損傷的新機制。
　　方法：選用6-8周的雌性Balb/c小鼠作為試驗對象,經適應性飼養(yǎng)5-7天后,選用25g左右的健康小鼠進入實驗隊列,根據實驗目的將動物隨機分成空白對照(5只)和TCE實驗組(75只

2、,其中1d組,2d組,3d組,7d組和14d組各15只)。每日稱量小鼠體重,觀察小鼠健康狀態(tài);參考豚鼠最大反應試驗(Guinea Pig Maximization Test,GPMT)方法建立小鼠的致敏模型;依據《化學品毒性鑒定技術規(guī)范》(衛(wèi)監(jiān)督【2005】272號)觀察和記錄小鼠背部皮膚反應情況并對皮膚反應進行評分,當受試動物反應積分≥1時,判斷為皮膚致敏反應陽性,該動物即被劃為致敏組,其余則為未致敏組。分別在皮膚激發(fā)后1d、2d、3

3、d、7d和第14d眼靜脈叢采血并制備血清用于ELISA試劑盒檢測血清中IL-17和IL-6細胞因子的表達水平,處死動物后取脾臟制成細胞懸液采用流式細胞術測定脾細胞懸液中Th17細胞的數量和比例,皮膚組織用于觀察病理和免疫組化實驗測定皮膚組織中IL-17和IL-6的表達。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗結果進行統(tǒng)計分析。
　　結果：1.致敏率參考豚鼠最大值試驗建立小鼠TCE致敏模型,空白對照組未見到皮膚紅斑或水腫,TCE實驗組小鼠可

4、見到皮膚損傷,本次實驗條件下,小鼠的致敏率為36％;
　　2.皮膚病理空白對照組小鼠皮膚組織中未見粒細胞浸潤和表皮層增厚等炎癥反應;致敏組小鼠可見明顯的皮膚炎癥改變,表皮層增厚,真皮、毛囊周圍水腫,壞死,有大量中性粒細胞、炎細胞浸潤。
　　3.小鼠脾細胞懸液Th17細胞檢測結果與空白對照組相比,2d致敏組、3d致敏組小鼠Th17細胞數量明顯升高,且差異有統(tǒng)計學意義;與1d致敏組相比,2d致敏組和3d致敏組小鼠Th17細胞數量

5、也明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義;與2d致敏組相比,7d致敏組和14d致敏組的細胞數量降低,差異有統(tǒng)計學意義;與3d致敏組相比,7d致敏組和14d致敏組相比細胞數量同樣降低,差異有統(tǒng)計學意義。
　　4.血清中IL-17檢測結果1d、2d及3d致敏組血清中IL-17的表達結果均高于空白對照組,且差異有統(tǒng)計學意義;與1d致敏組相比,7d致敏組和14d致敏組的表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義;與2d致敏組相比,2d未致敏組、7d致敏組和14d

6、致敏組血清中IL-17表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義;與3d致敏組相比,3d未致敏組、7d致敏組和14d致敏組血清中IL-17表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義。
　　5.皮膚組織中IL-17表達結果1d、2d及3d致敏組皮膚組織中IL-17的表達結果均高于空白對照組,且差異有統(tǒng)計學意義;與1d致敏組相比,3d致敏組和7d致敏組的表達結果升高,差異有統(tǒng)計學意義;與2d致敏組相比,2d未致敏組的表達水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義,而3d

7、致敏組的水平上升,差異有統(tǒng)計學意義;與3d致敏組相比,3d未致敏組和7d致敏組皮膚組織中IL-17的表達水平降低,差異具有統(tǒng)計學意義;7d致敏組與7d未致敏組之間比較,未致敏組表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義。
　　6.血清中IL-6檢測結果與空白對照組相比,1d、2d、3d及1w致敏組小鼠血清中IL-6的表達水平上升,差異有統(tǒng)計學意義;與1d致敏組相比,1d未致敏組和2d、3d、1w致敏組小鼠血清IL-6的表達差異有統(tǒng)計學意義;與

8、2d致敏組相比,2d未致敏組及3d、1w、2w致敏組的表達水平差異有統(tǒng)計學意義;與3d致敏組相比,3d未致敏組及2w致敏組IL-6的表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義;1w未致敏組和2w致敏組的表達水平也低于1w致敏組,差異有統(tǒng)計學意義。
　　7.皮膚組織中IL-6表達結果2d、3d及7d致敏組皮膚組織中IL-6的表達結果高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義;3d致敏組皮膚組織中IL-6的表達高于1d致敏組,且差異有統(tǒng)計學意義;與2d致敏

9、組相比較,2d未致敏組和2w致敏組皮膚IL-6的表達降低,差異有統(tǒng)計學意義;與3d致敏組相比較,3d未致敏組及2w未致敏組皮膚組織IL-6表達降低,差異有統(tǒng)計學意義;1w未致敏組與1w致敏組比較, IL-6的表達有差異,差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：1.TCE對小鼠有致敏作用,在本次試驗中,致敏率為36%。
　　2.Th17細胞及其相關的細胞因子IL-17、IL-6等參與TCE皮膚致敏反應,可能在致敏過程中發(fā)揮作用,并在三氯