CpGODN對(duì)哮喘小鼠肺組織共刺激分子B7和CD40表達(dá)的影響.pdf

1、目的：(1)建立急性支氣管哮喘小鼠模型，觀察共刺激分子B7和CD40、FcεRI、FcγRⅡb在肺組織中的表達(dá)情況(2)觀察CpGODN對(duì)哮喘小鼠肺組織共刺激分子B7和CD40、FcεRⅠ、FcγRⅡb的影響，探討其誘導(dǎo)免疫耐受的可能機(jī)制(3)觀察糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘小鼠肺組織共刺激分子B7和CD40、FcεRⅠ、FcγRⅡb的影響，探討其誘導(dǎo)免疫耐受的可能機(jī)制。 方法：48只清潔級(jí)雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組(A組

2、)、哮喘組(B組)、地塞米松治療組(C組)、CpGODN治療組(D組)，每組12只。B組參照李昌崇等[1]方法并稍作改進(jìn)，以卵清白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)建立小鼠急性哮喘模型。A組致敏和激發(fā)均以生理鹽水替代OVA，C組和D組均以O(shè)VA致敏，但激發(fā)前一天和每次激發(fā)前1h分別腹腔注射(intraperitonealinjection,i.P)DXM0.5mg/kg和CpGODN50μg/只[2]。各實(shí)驗(yàn)組末次激發(fā)后24小時(shí)后收集支氣管肺泡灌

3、洗液(BALF)計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)并分類；取肺組織作病理檢測(cè)在光鏡、電鏡下觀察小鼠氣道炎癥情況；逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測(cè)定肺組織中B7、CD40和FcεRⅠ、FcγRⅡbmRNA的表達(dá)；采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定肺組織中B7-1(CD80)和CD40蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： (1)BALF中炎癥細(xì)胞情況：各組BALF中細(xì)胞總數(shù)、EOS絕對(duì)值計(jì)數(shù)、EOS細(xì)胞總數(shù)的百分比(EOS％)的比較，與A組相比，B組BALF中細(xì)胞總

4、數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)絕對(duì)值以及EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比(EOS％)顯著增加(P＜0.01)，C、D兩組無(wú)顯著變化；與B組相比，C組、D組上述各指標(biāo)顯著減少(P＜0.01)：與C組相比，D組上述各指標(biāo)無(wú)顯著變化。 (2)肺組織病理改變：A組支氣管黏膜上皮、黏膜肌層完好，支氣管管腔規(guī)則，周圍無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，管腔內(nèi)無(wú)明顯分泌物貯留；B組支氣管收縮，管腔狹窄支氣管及血管周圍有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(以EOS、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主

5、)，黏液分泌明顯增加。黏膜上皮壞死脫落，基底膜露出，支氣管內(nèi)分泌物貯留，并有基底膜增厚和平滑肌肥大增生等表現(xiàn)；C組和D組支氣管和血管周圍可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏液分泌明顯減少，支氣管平滑肌無(wú)明顯增厚。 (3)肺組織超微結(jié)構(gòu)：電鏡下A組顯示正常肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，支氣管纖毛細(xì)胞纖毛排列整齊；B組顯示肺泡隔明顯增厚，基底膜增厚，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)吞噬小體，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹，脫落于肺泡腔內(nèi)，出現(xiàn)板層體空泡化和部分排空現(xiàn)象，支氣管纖毛

6、細(xì)胞纖毛排列稀疏或斷裂；C組和D組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞板層小體及線粒體空泡變性現(xiàn)象不明顯，支氣管上皮細(xì)胞纖毛排列尚整齊。 (4)RT-PCR法檢測(cè)肺組織CD80、CD86、CD40、FcεRⅠ、FcγRⅡb表達(dá)結(jié)果：肺組織中CD80、CD86和CD40mRNA的表達(dá)，B組[分別為(1.30±0.16)、(1.30±0.37)和(1.85±0.21)]均顯著高于A組[分別為(0.92±0.20)、(0.83±0.13)和(1.11±0

7、.27)](均P＜0.01)；C和D組[分別為(0.94±0.15)、(0.70±0.09)、(1.29±0.19)和(1.04±0.14)、(0.67±0.26)、(1.15±0.25)]顯著低于B組(P＜0.05或P＜0.01)；C組與D組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。肺組織中FcεRⅠmRNA的表達(dá)，B組[為(1.33±0.46)顯著高于A組[為(0.69±0.14)、(P＜0.01)；C和D組[分別為(0.76±0.16)和(0.

8、81±0.12)顯著低于B組(P＜0.01)；C組與D組無(wú)顯著差異(P＞0.05)；肺組織中FcγRⅡbmRNA的表達(dá)，B組[為(0.84±0.16)顯著低于A組[為(1.47±0.44)、(P＜0.01)；C和D組[分別為(1.26±0.21)和(1.25±0.45)顯著高于B組(P＜0.01)；C組與D組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。 (5)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織CD80、CD40蛋白表達(dá)結(jié)果：免疫組化顯示CD80、CD40

9、蛋白主要表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞及支氣管周圍的炎性細(xì)胞中。肺組織CD80平均吸光度值(MOD)比較，B組與A組比較：B組(0.29±0.04)支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)的吸光度值顯著高于A組(0.18±0.03(P＜0.01)；C組(0.19±0.02)、D組(0.16±0.02)顯著低于B組(P＜0.01)；C組與D組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。肺組織CD40平均吸光度值(MOD)比較，B組與A組比較：B組(0.22±0.03)支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)

10、的吸光度值顯著高于A組(0.17±0.07(P＜0.05或P＜0.01)；C組(0.15±0.04)、D組(0.15±0.05)顯著低于B組(P＜0.01)；C組與D組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。 (6)相關(guān)分析：肺組織共刺激分子CD80和CD40陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(MOD值)呈正相關(guān)(r=0.33，P＜0.05，n=40)。肺組織共刺激分子CD86mRNA和CD40mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.52，P＜0.01，n=40)。肺組織共

11、刺激分子CD80mRNA和CD86mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.49，P＜0.05，n=40)。小鼠肺組織FcεRⅠmRNA和FcγRⅡbmRNA表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(分別為r=-0.47，P＜0.01，n=40)。 結(jié)論： (1)OVA急性支氣管哮喘小鼠模型肺組織表達(dá)共刺激分子B7和CD40、FcεRⅠ明顯增多，F(xiàn)cγRⅡb減少，表明共刺激分子和FcεRⅠ、FcγRⅡb在支氣管哮喘中起作用。 (2)CpGODN降低