減毒活菌卡介苗對(duì)哮喘小鼠肺組織STAT-6表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察減毒活菌卡介苗(BCG)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥、Th1和Th2型細(xì)胞因子、肺組織中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT-6)mRNA含量以及STAT-6蛋白表達(dá)的影響，探討B(tài)CG治療哮喘的效果和原理，為BCG用于哮喘的治療提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　 將入選的30只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N組)、哮喘組(A組)、BCG治療組(B組)3組，每組10只。正常對(duì)照組：用生理鹽水代

2、替卵清白蛋白(OVA)進(jìn)行小鼠腹腔注射和霧化吸入；哮喘組以O(shè)VA致敏激發(fā)小鼠；BCG治療組于OVA致敏前及后5d分別以BCG皮內(nèi)注射干預(yù)。所有小鼠在最后一次抗原激發(fā)后24h被處死并收集標(biāo)本，計(jì)數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中的白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)數(shù)目，蘇木素-伊紅(HE)染色觀察小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)BALF中干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)水平，以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

3、(RT-PCR)法和免疫組織化學(xué)(IH)法觀察各組小鼠肺組織中STAT-6mRNA含量及STAT-6蛋白表達(dá)。所得數(shù)據(jù)均使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SAS8.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 [結(jié)果]
　　 1.小鼠哮喘模型的建立
　　 小鼠經(jīng)OVA致敏并激發(fā)后表現(xiàn)為呼吸急促、煩躁不安和腹肌抽搐等癥狀，病理切片顯示哮喘小鼠肺組織支氣管黏膜水腫，黏膜上皮脫落，支氣管及血管周圍大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)為主，肺泡腔

4、也可見散在大量炎癥細(xì)胞，符合哮喘的病理改變，提示哮喘模型制備成功。
　　 2.小鼠氣道、肺組織炎癥的變化
　　 病理學(xué)HE染色發(fā)現(xiàn)：正常對(duì)照組小鼠氣道、血管周圍及肺實(shí)質(zhì)幾乎無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮完整；哮喘組小鼠氣道、血管周圍均可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并波及到肺實(shí)質(zhì)，上皮脫落不完整；BCG治療組小鼠氣道及血管周圍的炎性細(xì)胞較哮喘組明顯降低，上皮也基本完整。
　　 3.小鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)及EOS計(jì)數(shù)的變化
　

5、　 哮喘組BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、EOS計(jì)數(shù)較正常對(duì)照組明顯升高(P<0.01)；BCG治療組BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、EOS計(jì)數(shù)仍高于正常對(duì)照組(P<0.01)，但顯著低于哮喘組(P<0.01)。
　　 4.小鼠BALF中IL-4和IFN-γ水平的變化
　　 哮喘組BALF中IL-4水平較正常對(duì)照組明顯升高(P<0.01)、IFN-γ水平較正常對(duì)照組顯著下降(P<0.01)；BCG治療組BALF中IL-4與IFN-γ水

6、平仍分別高于正常對(duì)照組(P<0.05)，但BALF中IL-4水平較哮喘組明顯下降(P<0.01)、IFN-γ水平較哮喘組顯著升高(P<0.01)。
　　 5.小鼠肺組織中STAT-6mRNA含量和STAT-6蛋白表達(dá)的變化
　　 哮喘組小鼠肺組織中STAT-6mRNA含量和STAT-6蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組明顯升高(P<0.01)；BCG治療組小鼠肺組織中STAT-6mRNA含量和STAT-6蛋白表達(dá)仍分別高于正常對(duì)照組(

7、P<0.05)，但STAT-6mRNA含量和STAT-6蛋白表達(dá)較哮喘組顯著降低(P<0.01)。
　　 6.小鼠BALF中EOS與IL-4水平的關(guān)系
　　 小鼠BALF中EOS與IL-4水平呈顯著正相關(guān)(n=30，r=0.905，P<0.01)。
　　 7.小鼠肺組織中STAT-6蛋白表達(dá)與BALF中IL-4水平的關(guān)系
　　 小鼠肺組織中STAT-6蛋白表達(dá)與BALF中IL-4水平呈顯著正相關(guān)(n=30

8、，r=0.824，P<0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.Th1、Th2細(xì)胞因子的失衡可能在哮喘的發(fā)病中起作用；BALF中EOS水平的增高可能與IL-4水平的增高有關(guān)。
　　 2.STAT-6mRNA及其蛋白表達(dá)的增加在哮喘的發(fā)病中起作用；BALF中IL-4水平的增高可能與肺組織STAT-6蛋白表達(dá)的增高有關(guān)。
　　 3.BCG可能通過(guò)抑制STAT-6mRNA及其蛋白的表達(dá)、提高IFN-γ的水平，從而