血清腺苷脫氨酶勻相法檢測新技術的研究.pdf

1、目的:
　　 建立快速、靈敏的血清腺苷脫氨酶勻相法(Adenosine Deaminase,ADA)檢測新技術。
　　 方法:
　　 通過酶催化反應動力學體系選擇、表面活性劑選擇、液體酶穩(wěn)定條件、近中性體系下熒光、化學發(fā)光法實驗條件的選擇等關鍵技術研究,建立了嘌呤核苷磷酸化酶-黃嘌呤氧化酶-過氧化物酶(PNP-XTO-POD)偶聯可見光勻相終點法測定血清ADA、PNP-XTO-POD偶聯單一試劑可見光勻相速率法測

2、定血清ADA、嘌呤核苷磷酸化酶-黃嘌呤氧化酶-尿酸酶-過氧化物酶(PNP-XTO-UAO-POD)偶聯雙試劑可見光勻相速率法測定血清ADA、PNP-XTO-POD偶聯熒光勻相終點法測定血清ADA、PNP-XTO-POD偶聯化學發(fā)光勻相終點法測定血清ADA的新方法。
　　 結果:
　　 PNP-XTO-POD偶聯可見光勻相終點法測定血清ADA,線性范圍為0.10～140.00U/L,平均回收率為100.30％,批內變異系數

3、(CV)和批間變異系數分別為0.018～0.032和0.031～0.037,與美國Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=1.0023X-0.0953,r=0.9998,與全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=0.9982X+0.2915,r=0.9996,膽紅素少于20.00mg/dL、甘油三酯少于750.00mg

4、/dL、血紅蛋白少于100.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對37.00U/L腺苷脫氨酶測定無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90～20.30U/L。
　　 PNP-XTO-POD偶聯單一試劑可見光勻相速率法測定血清ADA,線性范圍為0.08～129.00U/L,平均回收率為99.40％,批內變異系數(CV)和批間變異系數分別為0.013～0.031和022～0.041,與美國Diazyme Labor

5、atores提供的ADA檢測試劑方法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=0.9999X+0.0545,r=0.9973,與全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y:1.0001X-0.0300,r=0.9990,膽紅素少于22.00mg/dL、甘油三酯少于780.00mg/dL、血紅蛋白少于100.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對37.00U/L腺苷脫氨酶測定

6、無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90～20.30U/L。
　　 PNP-XTO-UAO-POD偶聯雙試劑可見光勻相速率法測定血清ADA,線性范圍可達0.05～129.00U/L,平均回收率為101.70％,批內變異系數(CV)和批間變異系數分別為0.011～0.029和0.025～0.034,與美國Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=0.

7、9951X+0.6074,r=0.9990,與全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=0.9990X+0.2716,r=0.9993,膽紅素少于22.00mg/dL、甘油三酯少于780.00mg/dL、血紅蛋白少于100.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對37.00U/L腺苷脫氨酶測定無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90～20.30U/L。
　　 PNP-

8、XTO-POD偶聯熒光勻相終點法測定血清ADA,線性范圍為0.01～100.40U/L,平均回收率為99.04％,批內變異系數(CV)和批間變異系數分別為0.016～0.037和0.021～0.043,與美國Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=1.0029X+0.0054,r=0.9980,與全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和

9、相關系數分別為Y=1.0033X+0.0087,r=0.9987,膽紅素少于25.00mg/dL、甘油三酯少于750.00mg/dL、血紅蛋白少于120.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對37.00U/L腺苷脫氨酶測定無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90～20.30U/L。
　　 PNP-XTO-POD偶聯化學發(fā)光勻相終點法測定血清ADA,線性范圍為0.001～129.00U/L,平均回收率為100.

10、07％,批內變異系數(CV)和批間變異系數分別為0.049～0.058和0.055～0.072,與美國Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=0.9708X+1.1671,r=0.9990,與全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關性,線性回歸方程和相關系數分別為Y=0.9975X-0.5811,r=0.9990,膽紅素少于25.00mg/dL、甘油三酯