人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移細胞系的建立及生物學特性的研究.pdf

1、目的：篩選人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移惡性腫瘤細胞亞群，并對其生物學特性進行鑒定和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因差異表達的研究。方法：將卵巢癌細胞株SKOV3細胞種植于裸鼠爪墊下，待植入物在裸鼠體內(nèi)成瘤并發(fā)生轉(zhuǎn)移時，取其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶癌細胞再次種植于裸鼠爪墊下傳代，每代均取出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶瘤組織進行細胞培養(yǎng)，通過單細胞分離(克隆)培養(yǎng)或局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶篩選的方法建立連續(xù)傳代細胞系，重復傳3代后，通過裸鼠接種實驗觀察各代裸鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。利用細胞生長曲線測定、H

2、E染色、染色體分析、流式細胞儀、裸鼠接種、免疫組化等方法鑒定各代細胞的生物學特性?；蛐酒夹g(shù)研究各代轉(zhuǎn)移的細胞與原代細胞進行與轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的差異表達。結(jié)果：所建立的連續(xù)傳代細胞系，分別命名為SKOV3-PM1，SKOV3-PM2和SKOV3-PM3細胞，癌細胞在裸鼠體內(nèi)傳3代后，裸鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為100％(10/10)，形成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目較母系為多，母系轉(zhuǎn)移率10％(1/10)，統(tǒng)計學分析P<0.05，有顯著差異。且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移途

3、徑較為單一；細胞染色體分析顯示原代SKOV3細胞染色體數(shù)目眾數(shù)為83～89條，SKOV3-PM3染色體眾數(shù)91～105條，并保持著卵巢上皮癌細胞生物學特性；SKOV3-PM3細胞倍增時間為22.7 h，原代SKOV3細胞為49.9 h，前者的生長速度明顯快于后者。流式細胞分析顯示，SKOV3-PM細胞DNA合成期和分裂期細胞的比例高于母株SKOV3細胞。本研究在96個人類已知與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)基因的篩選中發(fā)現(xiàn)60個表達差異性基因，將SKOV