家蠶卵巢細胞系BmN-SWU1的建立及其生物學特性的研究.pdf

1、昆蟲細胞系已經(jīng)成為生物學、生物技術、生物制藥以及生物殺蟲劑等研究中的重要工具。家蠶作為一種模式昆蟲，對家蠶細胞進行體外培養(yǎng)，應用培養(yǎng)細胞進行理論研究和生產(chǎn)應用，長期以來倍受關注。雖然前人在這方面做了大量工作，但現(xiàn)有的家蠶細胞系數(shù)量仍然偏少，且應用于生產(chǎn)的家蠶細胞系更少。家蠶基因組框架圖完成以后，家蠶功能基因組研究需要提供不同發(fā)育時期、不同分化程度、不同組織特異性的家蠶細胞系作為研究平臺。為了滿足家蠶細胞生物學、發(fā)育生物學和分子生物學，新

2、的桿狀病毒表達載體系統(tǒng)以及家蠶細胞工程等方面的研究需要，迫切需要建立和研究新的家蠶細胞系。 本研究在前人的研究基礎上，通過對家蠶品種21-872n1w的卵巢組織進行兩年多的原代培養(yǎng)，得到高繁殖率的細胞群體，經(jīng)過逐步分離純化，建立了家蠶卵巢細胞系BmN-SWU1。該細胞系的生物學特性如下： 1.該細胞系是以多邊形、圓形及短梭形細胞為主的貼壁上皮型細胞系，圓形細胞直徑為9～31μm，短梭形細胞的大小為19～52μm×5～21

3、μm。 2.BmN-SWU1細胞生長速度快，繁殖力強；細胞接種后，從72h到192h是BmN-SWU1細胞的對數(shù)生長期，在192h時細胞濃度達到頂峰，最終細胞鋪平率達80％以上；細胞群體倍增時間為57.74h。 3.BmN-SWU1細胞系的染色體具有鱗翅目昆蟲染色體的典型特征，中期染色體呈短桿狀或顆粒狀，具彌散型著絲粒。二倍體細胞(2n=56)比例高達80.5％，屬二倍體細胞系，未見異常有絲分裂現(xiàn)象，較好地保持了家蠶卵巢

4、細胞的有絲分裂和染色體特征。 4.BmN-SWU1細胞在接種家蠶核型多角體病毒BmNPV48h后就可見到少量細胞內產(chǎn)生了BmNPV病毒多角體，96h時可觀察到有50.29％的細胞內有多角體產(chǎn)生；在120h時，感染率達83.01％；在144h時，有89.91％細胞產(chǎn)生多角體，并且大多數(shù)細胞已經(jīng)破裂。測得其TCID50值為1.626×10-6。同樣條件下，對照組細胞及對照細胞系BmN在接種BmNPV192h后均未發(fā)現(xiàn)BmNPV多角體

5、的產(chǎn)生。 5.經(jīng)考馬斯亮藍R-250染色法顯示，在梭形BmN-SWU1細胞中的微絲束是與細胞長軸方向一致的纖維，有時在兩端彎曲成弧形?？v向的微絲束長短不一，許多從細胞一端直達另一端，微絲束常出現(xiàn)分枝和合并，使得整個微絲系統(tǒng)連結成一個網(wǎng)格。圓形的BmN-SWU1細胞中的微絲束以細胞核為中心，向細胞膜方向呈輻射狀排列，微絲束也常出現(xiàn)分枝和合并，結成一個網(wǎng)格。這些微絲束構成細胞形狀的基本輪廓。 綜上所述，經(jīng)兩年多的家蠶卵巢組織