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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:建立一株純種新西蘭白兔舌癌細(xì)胞系,并對(duì)細(xì)胞系的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定和分析,為進(jìn)一步研究舌癌的發(fā)生機(jī)制、發(fā)展規(guī)律及治療方法奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法:⑴通過(guò)RSCC-1細(xì)胞懸液法建立兔舌癌動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P停\(yùn)用Transwell Permeable Supports原代培養(yǎng)法和組織塊貼壁法對(duì)成瘤組織進(jìn)行原代培養(yǎng),并比較兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。⑵通過(guò)反復(fù)差異貼壁法和消化排除法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行純化。⑶生物學(xué)特性研究:通過(guò)掃描電鏡和透射電鏡對(duì)培養(yǎng)細(xì)
2、胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)描述和研究;制備細(xì)胞染色體標(biāo)本,油鏡下隨機(jī)選取樣本細(xì)胞,統(tǒng)計(jì)細(xì)胞染色體眾數(shù);運(yùn)用CCK-8試劑盒測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)周期內(nèi)OD值,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,判定細(xì)胞活力;通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期,分析各期特征;運(yùn)用廣譜角蛋白(pan-CK)和波形蛋白(Vimentin)進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè),確定組織來(lái)源;進(jìn)行細(xì)胞同種異體(新西蘭白兔)成瘤實(shí)驗(yàn)和異種(裸鼠)成瘤實(shí)驗(yàn),并計(jì)算成瘤率。
結(jié)果:①建立了一株新西蘭白兔舌鱗癌細(xì)胞系,并命名
3、為“RSCC-1a”,現(xiàn)已穩(wěn)定連續(xù)傳至30代。②RSCC-1a的生物學(xué)特性:細(xì)胞形態(tài)學(xué):細(xì)胞為多角形,呈現(xiàn)典型的鋪路石狀(倒置顯微鏡);細(xì)胞周邊分布微絨毛,細(xì)胞內(nèi)部細(xì)胞器(線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng))大量存在,細(xì)胞間連接緊密,觀察到橋粒、張力原纖維典型細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)(電鏡);染色體特征:染色體眾數(shù)分布在75-105條之間,51.82%細(xì)胞染色體數(shù)目分布在91-95條之間,30.91%細(xì)胞染色體數(shù)目分布在86-90條之間;RSCC-1a細(xì)胞染色體數(shù)目異
4、常,多為超四倍體和四倍體;細(xì)胞行為學(xué):RSCC-1a細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”型,分為潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和平臺(tái)期;以15代RSCC-1a細(xì)胞的周期分布為例:G1期細(xì)胞占79.92%,S期細(xì)胞占12.16%,G2期細(xì)胞占7.92%,G2/G1=1.80;免疫原性:廣譜角蛋白(pan-CK)免疫反應(yīng)呈陽(yáng)性,波形蛋白(Vimentin)表達(dá)陰性;成瘤特性:同種異體(兔)成瘤率為100%,異種(鼠)成瘤率為100%。
結(jié)論:成功建立新西蘭白
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