雌激素受體相關受體α、γ與雌激素受體在子宮內膜樣腺癌中的表達.pdf

1、目的和意義：
　　 子宮內膜癌作為女性生殖道最常見三大惡性腫瘤之一,約占女性生殖道癌瘤的20％-30％,而且近年來其發(fā)病率有上升趨勢。子宮內膜樣腺癌占子宮內膜癌的3/4,其發(fā)病因為一直是人們研究的熱點,現在認為其主要因為為持續(xù)、長期、異常的雌激素的刺激,和/或缺乏孕激素的拮抗。人體內的雌激素來源廣泛,主要來源于卵巢、胎盤,絕經后婦女主要來源于腎上腺。雌激素在子宮內膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起了重要的作用。因此,研究雌激素的作用機制

2、對明確子宮內膜樣腺癌發(fā)病機制有著重要的意義。
　　 經典的雌激素信號傳導由雌激素受體(estrogen receptor,ER)與配體結合并誘導ER.的構象改變開始,ER解離熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)形成E-ER復合物,可以直接與雌激素反應單元序列(estrogen relative element,ERE)結合,也可間接地通過蛋白質間相互作用與在啟動子結合,從而增高或降低mRNA的水平和相關蛋白

3、的產生,進而引起各自相應的生理反應。
　　 核受體超家族(nuclear receptor superfamily,NRs)是一類成員眾多的超家族轉錄因子,其中包括經典的配體依賴性受體和數目眾多的孤核受體。雌激素受體相關受體(estrogen receptor-related receptor,ERR)和ERs同屬于第3型核受體家族。目前,已發(fā)現ER有兩種亞型,即ERα和ERβ,ERRs有三種亞型,即ERRα、ERRβ和ERRγ

4、。ERα早在上世紀八十年代即被發(fā)現,并被認為是唯一的ER,直至十年后ERβ才被發(fā)現。ERRα、ERRβ最初是利用ERα受體的DBD區(qū)作為探針采用低嚴謹雜交技術從腎cDNA文庫中篩選出來,而ERRγ則于1999年利用GRIP1蛋白為誘餌通過酵母菌雙雜交技術篩選得到。ERRs和ERs分享了NRs家族的結構特征,并且二者氨基酸序列和基因序列具有很高的同源性。其基因結構主要為含有5個功能區(qū)的結構域,其中研究比較多的是A/B、C、E區(qū):A/B區(qū)含

5、有配體結合區(qū)1(ligand-dependent activation function 1,AF-1),其特異性較低,可以結合不同的因子以激活靶基因；C區(qū)被稱為DNA結合區(qū)(DNA-binding domain,DBD),ERα和ERβ在此區(qū)的同源性高達95％,ERRα與ERα此區(qū)同源性為66％,ERRγ的DBD與ERRα相比有93％一致；E區(qū)含有一個被稱為激素結合區(qū)(ligand-binding domain,LBD)的結構域和一個

6、配體結合區(qū)2(ligand-dependent activation function2,AF-2),ERα和ERβ在LBD的同源性達55％,ERRα與ERα此區(qū)同源性為33％。
　　 雌激素信號傳導中,ERs反應元件ERE和ERRs的反應元件(ERR responsiveelement,ERRE)也具有較高的同源性。ERE是5’-TGACCTnnnAGGTCA-3’反向回文序列(n為任一核苷酸),其核心為5’-AGGTCA-3

7、’序列。ERR單體識別的是則ERRE,該元件是具有相同核心并向5’端延伸3個核苷酸的序列,即5’-TnA-AGGTCA-3’。因此,ERs和ERRs均可識別以5’-AGGTCA-3’序列為核心的激素反應元件,且ERRs在體內未發(fā)現相應的天然配體,因此ERRs和ERs對ERE的轉錄活性具有相似性、競爭性。含有此核心序列的HRE結構變異體在人體內廣泛存在,比如:完整或不完整的ERE元件、ERRE元件、回文性的甲狀腺素反應元件(thyroid

8、 response element,TRE)以及甾體生成因子-1(SF-1因子)的反應元件(steroid factor-1 responsive element,SFRE)。這些都成為ERRs和ERs廣泛參與代謝并產生交互作用的基礎。因而兩個家族可能在子宮內膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展方面也發(fā)揮了重要作用。
　　 有研究表明ERα和ERβ可以形成ERα同源二聚體、ERβ同源二聚體或ERα/ERβ異源二聚體與ERE結合,以不同的活性參與

9、調控不同配體的生物學效應。ERRα也可以形成單體、同源二聚體識別ERRE產生雌激素效應或與ERα形成異源性二聚體干擾ER的基因調控。而ERRα的作用及活性在某種程度上又取決于ERα對ERE的結合程度。ERRγ也是ERRα在表達過程中密切聯系的家族成員,有研究表明ERRγ有調節(jié)ERRα表達水平的作用。而小鼠實驗表明ERRα減少會引起ERRγ上調。因此,研究ERRα、ERRγ、ERα和ERβ在子宮內膜組織表達對明確子宮內膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展有

10、著重要的意義。
　　 Ariazi等用real-time PCR的方法測量了ERRs和ERs在乳腺癌組織中的mRNA的表達,并評價了ERRα、ERRγ作為乳腺癌腫瘤標記物的作用和及其在癌癥患者預后評估中的作用。Kraus等曾對ERα(+)的乳腺癌細胞和ERα(-)的宮頸癌細胞中的ERRα進行分析,他發(fā)現ERR-α與ERα的表達關系密切。孫蓬明等用實時熒光定量PCR方法測量了ERRs和ERs在卵巢癌組織中的mRNA的陽性表達率,也

11、認為ERRs與ERs在卵巢組織中的相互作用可能是卵巢癌復雜的腫瘤內分泌生物學行為的分子基礎。鑒于既往研究的結果,我們認為作為雌激素依賴性腫瘤的子宮內膜樣腺癌,其發(fā)生發(fā)展的過程有可能與兩個家族相互作用的分子機制有關。目前,國內外的對ERR的研究主要停留在乳腺癌、卵巢癌上,對子宮內膜癌的研究也主要停留在細胞學上,采用的方法也多是采用普通PCR或免疫組化所做的定性研究。而對屬于雌激素依賴性子宮內膜癌的子宮內膜樣腺癌的報道也頗為罕見。因此,本研

12、究擬對ERs和ERRs兩個核受體家族在子宮內膜樣腺癌發(fā)病過程中的量的變化及相關關系進行探討。
　　 本研究采集子宮內膜組織標本進行檢測,并納入癌旁組織與癌組織、正常組織比較。結合考慮腫瘤的生物學行為,及癌旁組織的病理類型,我們用癌旁組織評價正常內膜發(fā)展到癌之間的癌前病變。采用Taqman熒光定量PCR的方法檢測ERRα、ERRγ、ERα和ERβ在子宮內膜的癌變過程中mRNA的表達量的變化,并結合子宮內膜樣腺癌患者的臨床病理資料進

13、行綜合分析,探討ERRs和ERs在子宮內膜的癌變過程中表達的相關性及其臨床意義,以期為揭示子宮內膜樣腺癌的發(fā)生機制提供新的思路與靶點。
　　 方法與內容：
　　 1.研究對象
　　 本研究共收集44例子宮內膜樣腺癌組織、30例正常組織及30例癌旁組織,所有標本均經病理切片HE染色明確診斷后納入,手術病理分期按2000年國際婦產科聯盟(FIGO)的標準進行分期,所有患者術前均未接受放、化療及激素治療。
　　

14、 2.研究方法
　　 采用TRIzol一步法提取所有組織總RNA,檢測所有組織總RNA的質量和完整性,再將總RNA逆轉錄轉成cDNA,采用熒光實時定量PCR的Taqman探針法測量所有組織標本中ERα、ERβ、ERRα及ERRγmRNA的表達水平,用標準曲線的相對定量法計算目標基因表達量。
　　 3.統(tǒng)計學方法
　　 采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。ERα、ERβ、ERRα、ERRγmRNA表達水平差異

15、及ERα/ERβ、ERα/ERRα、ERRα/ERRγ比值的變化三組比較采用非參數法Kruskal-Wallis H檢驗,進一步做兩兩比較采用Nemenyi法。采用Spearman等級相關分析癌組織中ERα、ERβ、ERRα、ERR-γ四項指標與分期、分級的關系。P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1.ERα、ERβ、ERRα及ERRγ四項指標在癌旁組織中的表達均明顯高于正常組織和癌組織,即癌前組織中ERs