雌激素跨膜受體GPR30在子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)及其調(diào)控.pdf

1、雌激素是子宮內(nèi)膜癌的致病因子，雌激素與經(jīng)典的核受體結(jié)合后，介導(dǎo)基因組信號(hào)(genomic signaling)的產(chǎn)生，參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生進(jìn)展。GPR30是一種新型的雌激素功能性膜受體，是G蛋白偶聯(lián)受體超家族的成員，與經(jīng)典的核受體不同的是，雌激素與GPR30結(jié)合后介導(dǎo)雌激素的快速非基因組效應(yīng)(nongenomic signaling)，引起細(xì)胞內(nèi)酶的活化、第二信使的產(chǎn)生和信號(hào)傳導(dǎo)，因此GPR30可能在子宮內(nèi)膜癌中也發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本

2、研究擬采用RT-PCR、Realtime PCR、western blot、RNAi、裸鼠荷瘤模型等技術(shù)和方法，研究GPR30在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生進(jìn)展中的調(diào)控作用，闡明GPR30作用的分子機(jī)理以及參與GPR30發(fā)揮作用的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，補(bǔ)充現(xiàn)有的對(duì)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生進(jìn)展的認(rèn)識(shí)，有助于找到藥物治療的新靶點(diǎn)，為臨床診斷、治療和預(yù)后預(yù)測(cè)提供理論依據(jù)。
　　 首先，探討雌激素膜受體GPR30在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其意義。方法：RT-PCR和免疫組

3、織化學(xué)法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中GPR30mRNA和蛋白表達(dá)，分析GPR30的表達(dá)與臨床病理聯(lián)系；免疫細(xì)胞化學(xué)分析GPR30蛋白在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系RL95-2(ER+)和KLE(ER-)中的表達(dá)。結(jié)果：子宮內(nèi)膜癌組織中GPR30的mRNA的表達(dá)水平顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(p＜0.05)；子宮內(nèi)膜癌組織中GPR30蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率(21/30例，70％)顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(5/17例，29.41％)(χ2=7.232

4、，P=0.007)；且腫瘤分級(jí)越高，GPR30表達(dá)陽(yáng)性率越高(p=0.003)，但GPR30表達(dá)與內(nèi)膜癌分期、肌層浸潤(rùn)深度和腹水轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(p＞0.05)；結(jié)論：雌激素膜受體GPR30表達(dá)于子宮內(nèi)膜癌組織，且其表達(dá)與腫瘤高分級(jí)存在相互聯(lián)系，提示GPR30可能在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮重要的作用。
　　 其次，探討雌激素膜受體GPR30在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)及其誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的活化。方法：RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)分析GPR30蛋白

5、在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系RL95-2(ER+)和KLE(ER-)中的表達(dá)；ELISA和western blot檢測(cè)雌激素(17β-estradiol)和GPR30激動(dòng)劑G1處理后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系RL95-2和KLE中MEK和ERK的活化水平；結(jié)果：雌激素膜受體GPR30表達(dá)于ER陰性(KLE)和ER陽(yáng)性(RL95-2)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系，雌激素和GPR30特異性激動(dòng)劑-G1能激活上述兩種細(xì)胞內(nèi)的MEK/ERK MAPK信號(hào)通路。結(jié)論：雌激素和

6、G1經(jīng)GPR30介導(dǎo)的MEK/ERK MAPK信號(hào)通路的激活有可能參與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的調(diào)控。
　　 最后，探討了經(jīng)GPR30介導(dǎo)的非基因組效應(yīng)(MEK/ERK MAPK信號(hào)通路激活)引起的雌激素和G1的效應(yīng)對(duì)子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)功能的調(diào)控和腫瘤形成的影響。方法：運(yùn)用RNAl干擾的方法篩選GPR30穩(wěn)定干擾的RL95-2和KE細(xì)胞系，Real time PCR檢測(cè)干擾效率；用CCK8方法分析雌激素(17β-estradiol)和G1處

7、理后RL95-2和KLE細(xì)胞的增殖情況，并觀察MEK/ERK/MAPK特異性抑制劑U0126對(duì)RL95-2和KLE細(xì)胞增殖的影響；用Western blotting、ELISA明膠酶譜和方法分別檢測(cè)雌激素(17β-estradiol)和G1處理后RL95-2和KLE細(xì)胞MMP2,MMP9的表達(dá)、分泌和活性，并觀察MEK/ERK/MAPK特異性抑制劑U0126和G蛋白抑制劑PTX對(duì)RL95-2和KLE細(xì)胞侵襲能力的影響；Matrigel侵