分子遺傳學(xué)基因研究在Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良一家系的應(yīng)用.pdf

1、背景：角膜營(yíng)養(yǎng)不良(cornealdystrophy)是一種少見的眼科遺傳病,會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的視力損害。角膜營(yíng)養(yǎng)不良分為很多類型,其中研究的最多的是與TGFBI基因相關(guān)的角膜營(yíng)養(yǎng)不良,多為常染色體顯性遺傳病,研究表明TGFBI基因即轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)突變基因,位于染色體5q31上,TGFBI(BIGH-3)相關(guān)的角膜營(yíng)養(yǎng)不良包括典型顆粒性角膜營(yíng)養(yǎng)不良(GCD,CDGG-I)與晶格狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良(CDL),Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良(GCD

2、-II),Reis—Bucklers角膜營(yíng)養(yǎng)不良(Reis-Bucklerscornealdystrophy,RBCD),Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良(Avellinocornealdystrophy)其發(fā)病較早,外顯率高,可>90％,男性與女性患病率無顯著差別。
　　目的：對(duì)角膜營(yíng)養(yǎng)不良一家系進(jìn)行臨床眼科檢查及分子遺傳學(xué)分析和分類,了解其家系是否存在TGFBI基因突變及TGFBI基因的突變類型。
　　方法：收集1個(gè)臨床診斷

3、為Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良的家系,家系中4名為角膜營(yíng)養(yǎng)不良患者,2名為表型正常成員,50名健康人群為對(duì)照。對(duì)所有參加實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行詳細(xì)視力檢查,病史詢問和裂隙燈顯微鏡檢查,并抽取外周血5m1置于EDTA抗凝真空采血管中。使用血液基因組DNA提取試劑提取血液DNA。后設(shè)計(jì)TGFBI基因所有17個(gè)外顯子的特異性引物,利用17個(gè)特異性引物進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增目的片段,對(duì)PCR反應(yīng)產(chǎn)物行DNA測(cè)序,將測(cè)序結(jié)果和GenBank進(jìn)行比對(duì)并分

4、析。結(jié)果該角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系4名患者裂隙燈顯微鏡檢查顯示中央角膜基質(zhì)淺層均有雪花狀,盤狀,結(jié)晶狀,桿狀角膜混濁,混濁間隙及周邊角膜透明。4名患者TGFBI基因第4號(hào)外顯子存在CGC>CAC(R124H)雜合突變,而家系表現(xiàn)正常成員及50名正常對(duì)照無此基因位點(diǎn)突變。同時(shí)4名患病家庭成員均存在同義單核苷酸多態(tài)性
　　(SNP):第11號(hào)外顯子雜合性的CTC>CTT(L472L),3名患者第12外顯子雜合性的TTT>TTC(F540F)一