莫能菌素多克隆抗體制備及應(yīng)用.pdf

1、本文合成莫能菌素結(jié)合抗原，制備高特異性抗體，改變包被原的結(jié)構(gòu)，以提高酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)靈敏度，并在成功研制多克隆抗體基礎(chǔ)上，初步進行了應(yīng)用。旨在建立一種簡便、可信、快速、靈敏的莫能菌素殘留分析方法，以對組織中莫能菌素殘留進行監(jiān)控，保證畜禽產(chǎn)品的質(zhì)量。 1．莫能菌素抗原制備 生產(chǎn)中制備的莫能菌素以鈉鹽形式存在，沒有直接與選用的載體蛋白質(zhì)(BSA、O

2、VA)偶聯(lián)的基團，因此不能直接用于人工抗原的合成，必須加以修飾形成含羧基的物質(zhì)才能合成人工抗原。本試驗采用琥珀酸酐法合成莫能菌素-琥珀酸酐衍生物(MON-HS)，并通過薄層層析進行鑒定。采用混合酸酐法將莫能菌素-琥珀酸酐(MON-HS)與載體蛋白(BSA，OVA)共價偶聯(lián)，合成免疫抗原(Mon-HS-OVA)，合成的免疫原通過SDS-PAGE電泳法進行鑒定，并通過蛋白染色法和香草醛法測得MON與BSA的結(jié)合比為14.7：1。 2

3、.抗莫能菌素多克隆抗體制備 用合成的Mon-HS-BSA免疫新西蘭大白兔，多次免疫后取血清，經(jīng)間接ELISA法測定抗體效價為1：25600(2號)。以MON濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，用這種方法確定的I<,50>為32.4ng／ml，以90％抑制率為其靈敏度，靈敏度為2.75ng／ml。為檢驗抗體的特異性，用鹽霉素，海南霉素，磺胺間甲氧嘧啶等3種藥物作為競爭抗原，做ELISA，結(jié)果顯示與這3種藥物沒有交叉反應(yīng)