HGF-C-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在結(jié)直腸癌同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、一.研究背景和研究目的
　　 結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，約有14.5％的患者在初診時(shí)發(fā)現(xiàn)伴有同時(shí)性肝臟轉(zhuǎn)移，發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者對(duì)常規(guī)治療效果不佳，導(dǎo)致其預(yù)后不良。更深入的探討和理解結(jié)直腸癌同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移機(jī)制，將為研究更有效的治療方案提供生物學(xué)理論基礎(chǔ)。HGF/c-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路系統(tǒng)在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。體外研究發(fā)現(xiàn)，HGF可促進(jìn)體外生長(zhǎng)的結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)。在HGF存在的狀態(tài)下，

2、Met能夠充分的將上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為侵襲表型。臨床報(bào)道發(fā)現(xiàn)，Met在結(jié)腸腺瘤、結(jié)直腸癌和轉(zhuǎn)移癌組織中過(guò)表達(dá)，而在正常結(jié)腸組織中弱表達(dá)或不表達(dá)，這表明了Met表達(dá)是結(jié)直腸癌發(fā)展過(guò)程中的早期事件。HGF在結(jié)直腸癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中也能檢測(cè)出表達(dá)。但觀察到HGF在結(jié)直腸癌和正常組織中表達(dá)無(wú)顯著性差異，這表明HGF和Met增強(qiáng)轉(zhuǎn)移潛能的能力取決于Met過(guò)表達(dá)對(duì)HGF表達(dá)的敏感性。結(jié)直腸癌原發(fā)癌組織Met過(guò)表達(dá)水平與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移等臨床病

3、理因素相關(guān)。在臨床治療中，酪氨酸激酶受體抑制劑已被用于治療進(jìn)展期結(jié)直腸癌（例如西妥昔單抗）。然而，耐藥性發(fā)生是常見(jiàn)的現(xiàn)象，HGF誘導(dǎo)的Met活性被證實(shí)是導(dǎo)致結(jié)直腸癌西妥昔單抗治療耐藥性發(fā)生的新機(jī)制。因此，聯(lián)合表皮生長(zhǎng)因子受體抗體和Met抗體可能有效的提高進(jìn)展期結(jié)直腸癌臨床治療效果，此研究已進(jìn)入臨床前期試驗(yàn)階段。以上這些研究發(fā)現(xiàn)提示，HGF/c-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路系統(tǒng)在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用和有望成為新的治療靶點(diǎn)。

4、r>　　 然而，很少有研究涉獵HGF/c-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在結(jié)直腸癌同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。DiRenzo等報(bào)道c-Met的過(guò)表達(dá)與結(jié)直腸癌腫瘤分期不相關(guān)，肝轉(zhuǎn)移組織中c-Met表達(dá)水平明顯高于原發(fā)灶。但Zeng等指出c-Met表達(dá)水平與結(jié)直腸癌Duke's分期相關(guān)，肝轉(zhuǎn)移組織中c-Met表達(dá)水平低于原發(fā)癌組織。HGF被認(rèn)為是間質(zhì)細(xì)胞分泌的作用于調(diào)節(jié)Met活性的分泌因子，然而，其在其他實(shí)體癌組織的上皮癌細(xì)胞中也有發(fā)現(xiàn)。在結(jié)直腸癌相

5、關(guān)研究中，有報(bào)道顯示研究病例中部分結(jié)直腸癌組織中HGF無(wú)表達(dá)，另有報(bào)道則指出HGF在全部研究的結(jié)直腸癌組織中表達(dá)水平增高。這些爭(zhēng)論引發(fā)對(duì)HGF和Met靶向藥物臨床療效的不確定，因此該系統(tǒng)在結(jié)直腸癌和肝轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制仍需要更進(jìn)一步的研究探討。
　　 二.臨床資料和方法
　　 從2001年6月至2010年6月在山東省腫瘤醫(yī)院住院新診斷的1557例結(jié)直腸癌患者資料庫(kù)中發(fā)現(xiàn)253例同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者，其中僅有30例同時(shí)性

6、肝轉(zhuǎn)移患者同時(shí)接受原發(fā)癌和肝轉(zhuǎn)移癌根治性切除術(shù)，并保存了完整的臨床病理資料。本研究根據(jù)患者區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)將實(shí)驗(yàn)組分為兩個(gè)亞組（伴區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移/不伴區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ（伴有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）21例TxN1-2M1(肝)和實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ（不伴有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）9例TxN0M1(肝)。依據(jù)實(shí)驗(yàn)亞組病例的狀況（年齡，性別，腫瘤浸潤(rùn)深度，分化程度和腫瘤部位等因素）匹配相對(duì)應(yīng)的對(duì)照亞組，實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ（TxN1-2M1(肝））中每例患者依據(jù)匹

7、配原則各匹配1例TxN1-2M0患者和1例TxN0M0患者。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ（TxN0M1(肝））中每例患者依據(jù)匹配原則各匹配1例TxN0M0患者。81例結(jié)直腸癌患者被包含在此研究中。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照匹配組匹配方式和臨床病理因素見(jiàn)表1。研究中51例無(wú)肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者經(jīng)根治性手術(shù)后隨訪(fǎng)至少6個(gè)月，以排除是否伴有同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移。所有病例手術(shù)前均未接受新輔助治療。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHC)和實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法，檢測(cè)原發(fā)腫

8、瘤組織（81例）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織（42例）和肝轉(zhuǎn)移組織（30例）中HGF和Met的蛋白和mRNA表達(dá)水平。本研究設(shè)計(jì)遵守1975年《赫爾辛基宣言》中規(guī)定的倫理標(biāo)準(zhǔn)。
　　 三.結(jié)果
　　 1.HGF、Met在結(jié)直腸癌伴同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者和結(jié)直腸癌無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)癌中的表達(dá)。
　　 結(jié)直腸癌細(xì)胞HGF表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析HGF表達(dá)與各臨床病理因素?zé)o相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ(TxN0M1)與其匹配對(duì)照組(Tx

9、N0M0)結(jié)直腸癌組織中HGF陽(yáng)性表達(dá)率分別是67％(6/9)和56％(5/9)，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.734）。而在實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ（TxN1-2M1(肝））與其匹配對(duì)照組（TxN11-2M0和TxN0M0）結(jié)直腸癌組織中HGF表達(dá)比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)，結(jié)直腸癌伴同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中HGF表達(dá)明顯高于結(jié)直腸癌無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者。在所有結(jié)直腸癌患者中，30例肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中21例(70％)HGF呈陽(yáng)性表達(dá)

10、，21例伴有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中9例(42.9％)HGF呈陽(yáng)性表達(dá)，30例無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中僅有9例(30％)HGF呈陽(yáng)性表達(dá)，伴轉(zhuǎn)移組與不伴轉(zhuǎn)移組之間HGF表達(dá)比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007）。
　　 結(jié)直腸癌細(xì)胞Met表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。在臨床病理因素中，Met表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期具有相關(guān)性(r=0.381，P=0.000)。N2期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中Met表達(dá)強(qiáng)

11、度明顯高于N1和N0期的結(jié)直腸癌患者。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ(TxN0M1(肝）)與其匹配對(duì)照組(TxN0M0)結(jié)直腸癌組織中Met陽(yáng)性表達(dá)率分別是89％(8/9)和67％(6/9)，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.436)。而在實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ（TxN1-2M1(肝））與其匹配對(duì)照組（TxN1-2M0和TxN0M0）結(jié)直腸癌組織中Met表達(dá)比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)直腸癌伴淋巴結(jié)及同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者（TxN1-2M1(肝））和結(jié)直腸癌伴淋巴

12、結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者（TxN1-2M0）原發(fā)癌組織中Met表達(dá)明顯高于結(jié)直腸癌無(wú)轉(zhuǎn)移患者(TxN0M0)。結(jié)直腸癌伴淋巴結(jié)及同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者（TxN1-2M1）和結(jié)直腸癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者（TxN1-2M0）之間原發(fā)癌組織中Met表達(dá)無(wú)顯著差異。在所有結(jié)直腸癌伴同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)癌Met表達(dá)陽(yáng)性率為90％(27/30)，結(jié)直腸癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)肝轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)癌Met表達(dá)陽(yáng)性率為86％(18/21)，結(jié)直腸癌無(wú)轉(zhuǎn)移患者原發(fā)癌Met

13、表達(dá)陽(yáng)性率為50％(15/30)，三組之間有顯著差異(P=0.004)。
　　 2.結(jié)直腸癌患者原發(fā)癌和肝轉(zhuǎn)移癌組織中HGF和MetmRNA表達(dá)
　　 結(jié)直腸癌原發(fā)癌和肝轉(zhuǎn)移癌組織中HGF和Met蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平存在顯著相關(guān)性，原發(fā)癌組織中(HGF:r=0.600P=0.003;Met:r=0.724，P=0.001)，肝轉(zhuǎn)移癌組織中(HGF:r=0.523P=0.032;Met:r=0.439P=0.03

14、7)。
　　 實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ（TxN0M1(肝））與其匹配對(duì)照組(TxN0M0)結(jié)直腸癌原發(fā)癌組織中HGF和MetmRNA表達(dá)比較無(wú)顯著差異(獨(dú)立t檢驗(yàn)，HGF:P=0.855;Met:P=0.646)。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ(TxN1-2M1(肝）)與其匹配對(duì)照組（TxN1-2M0和TxN0M0）結(jié)直腸癌原發(fā)癌組織中HGF和MetmRNA表達(dá)比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(單因素方差分析，HGF:P=0.038;Met:P=0.0082)。
　　

15、 對(duì)照結(jié)直腸癌原發(fā)癌和其對(duì)應(yīng)的肝轉(zhuǎn)移癌組織中HGF和MetmRNA表達(dá)水平無(wú)顯著差異。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ與實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ之間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。然而，當(dāng)仔細(xì)觀察每一配對(duì)癌組織中HGF和MetmRNA表達(dá)水平時(shí)，也發(fā)現(xiàn)一些配對(duì)原發(fā)癌和肝轉(zhuǎn)移癌組織中存在顯著差異表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅱ（TxN0M1(肝））與其匹配對(duì)照組(TxN0M0)結(jié)直腸癌原發(fā)癌和肝轉(zhuǎn)移癌組織中:對(duì)于HGFmRNA表達(dá)，4例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平相一致，另5例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平存在顯著差

16、異，其中4例結(jié)直腸癌患者肝轉(zhuǎn)移癌組織中HGFmRNA表達(dá)水平明顯高于其原發(fā)癌，1例患者肝轉(zhuǎn)移癌組織中HGFmRNA表達(dá)水平低于其原發(fā)癌（≥或＜20相對(duì)拷貝）;另對(duì)于MetmRNA表達(dá)，6例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平相一致，另3例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平存在顯著差異，2例結(jié)直腸癌患者肝轉(zhuǎn)移癌組織中MetmRNA表達(dá)水平明顯高于其原發(fā)癌，另有1例患者肝轉(zhuǎn)移癌組織中MetmRNA表達(dá)水平明顯低于其原發(fā)癌（≥或＜300相對(duì)拷貝）。實(shí)驗(yàn)亞組Ⅰ（TxN1

17、-2M1(肝））與其匹配對(duì)照組(TxN2-2M0和TxN0M0)結(jié)直腸癌結(jié)直腸癌原發(fā)癌和肝轉(zhuǎn)移癌組織中:對(duì)于HGFmRNA表達(dá)，18例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平相一致，另3例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平存在顯著差異，另對(duì)于MetmRNA表達(dá)，17例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平相一致，另4例原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌表達(dá)水平存在顯著差異。30例結(jié)直腸癌原發(fā)癌和其對(duì)應(yīng)的肝轉(zhuǎn)移癌組織中，73.3％(22/30)例HGFmRNA表達(dá)水平一致，76.7％(22/30)例Me