縫隙連接蛋白43、1，4，5三磷酸肌醇受體和P2X7受體在出生后不同鼠齡大鼠耳蝸中的表達變化及其意義的研究.pdf

1、第一部分大鼠耳蝸發(fā)育過程中Connexin43的表達差異
　　目的:
　　縫隙連接蛋白在聽覺系統(tǒng)中發(fā)揮十分重要的作用?？p隙連接蛋白(Cx)26、Cx30及Cx43突變被證實會引起非綜合征型遺傳性耳聾。到目前為止，縫隙連接蛋白突變致聾機制尚不清楚，但了解它們在耳蝸中表達及分布的變化是解決這一問題的前提條件。Cx26和Cx30在嚙齒類動物耳蝸中的定位表達已明確，但Cx43至今仍不能確定并且具有爭議。本研究擬通過重新檢測Cx43在

2、出生后不同鼠齡大鼠耳蝸的表達和分布，初步探討其在耳蝸發(fā)育過程中的作用。
　　方法:
　　依次取出生后1天(P1)、5天(P5)、、14天(P14)、17天(P17)和成年6組不同年齡段的Sprague-Dawley大鼠耳蝸，采用雙重熒光免疫組織化學染色方法，激光共聚焦顯微鏡觀察Cx43在發(fā)育中的大鼠耳蝸的分布與定位。應用Realtime PCR檢測P1、P8、P14大鼠耳蝸蝸軸Cx43mRNA的表達水平，進一步驗證我們免疫定

3、位Cx43蛋白的結果。
　　結果:
　　在P1、P5、P8、P14，Cx43在神經支配耳蝸感覺毛細胞的內螺旋叢和外螺旋束有特異性表達，并與耳蝸傳入神經標記物TUJ1染色有大量的重疊。而P17Cx43在內螺旋叢、外螺旋束的表達消失。Cx43在出生后不同鼠齡耳蝸中的螺旋神經元均有表達。Realtime PCR檢測結果顯示Cx43mRNA在P1、P8、P14大鼠蝸軸內表達具有差異性，在P8出現一個高峰，P14下降至最低水平。

4、>　　結論:
　　在聽覺出現前，Cx43特異性表達在內、外毛細胞下面的傳入神經末梢內螺旋叢與外螺旋束，并伴隨耳蝸傳入神經發(fā)育成熟的過程，表明Cx43構成的縫隙連接在耳蝸傳入神經發(fā)育及聽覺神經傳遞中發(fā)揮十分重要的作用。各組大鼠耳蝸螺旋神經元胞漿中均有Cx43表達，我們推測SGN可能是Cx43致聾的靶細胞。
　　第二部分1，4，5三磷酸肌醇受體和P2X7受體在出生后大鼠耳蝸發(fā)育不同時期的表達與變化
　　目的:
　　1

5、，4，5三磷酸肌醇受體(IP3R)是細胞內鈣釋放通道之一，其引起的耳蝸細胞內Ca2+濃度增加在聽覺功能中具有重要作用。本次實驗擬通過研究IP3R在不同鼠齡大鼠耳蝸中的表達差異，從而探討其在耳蝸發(fā)育發(fā)揮的作用。為了更進一步了解胞外Ca2+內流通道P2X7受體在耳蝸中的功能，在本研究中我們重新檢測了P2X7受體在發(fā)育中大鼠耳蝸的表達。
　　方法:
　　依次取出生后1天(P1)、5天(P5)、8天(P8)、14天(P14)和成年5

6、組不同年齡段的Sprague-Dawley大鼠耳蝸，采用免疫熒光染色方法，激光共聚焦顯微鏡和免疫熒光顯微鏡下觀察IP3R和P2X7受體在發(fā)育中的大鼠耳蝸的分布與定位。
　　結果:
　　P1組大鼠耳蝸Corti器內僅Hensen細胞表達IP3R。P5組IP3R開始出現在內毛細胞和3排外毛細胞表達，并向外延伸至Claudius細胞，Deiters細胞未出現IP3R的表達。螺旋神經元及血管紋三層細胞緣細胞、基底細胞和中間細胞也表達

7、IP3R。P8和P14組， IP3R在內、外毛細胞表達強度增高， Deiters細胞底部也出現IP3R染色。成年期大鼠耳蝸，IP3R集中表達在內外毛細胞，其在血管紋、螺旋神經元表達明顯下調。
　　P1組大鼠耳蝸Corti器內、外毛細胞強表達P2X7受體。血管紋的緣細胞，螺旋神經元也出現P2X7受體的弱表達。P12組在Corti器感覺毛細胞，P2X7受體陽性染色分布出現改變，主要表現在內、外毛細胞表皮板出現強染色，Deiters細胞

8、開始表達P2X7受體的染色。血管紋三層細胞均表達IP3受體，螺旋神經元胞漿強表達P2X7受體。成年期大鼠耳蝸，P2X7受體表達模式同P12，在內、外毛細胞，P2X7受體染色仍集中在毛細胞表皮板。
　　結論:
　　IP3R在耳蝸Corti器毛細胞和支持細胞的表達存在隨鼠齡的增加逐漸上調的趨勢，這表明IP3R參與耳蝸發(fā)育及耳蝸功能的調控。P2X7受體首次被發(fā)現在內、外毛細胞表皮板表達，提示其在毛細胞聲音轉導中發(fā)揮十分重要的功能。