SPIO標(biāo)記大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：生物學(xué)活性及體外MRI成像效應(yīng)評價(jià).pdf

1、目的：
　　進(jìn)一步研究不同濃度SPIO標(biāo)記大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對其生物學(xué)活性及分化能力及體外MRI成像效應(yīng)的影響，為SPIO成功應(yīng)用臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　采用全骨髓貼壁篩選法，分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rMSCs)，待細(xì)胞傳至第4代時(shí)，用0.75μg/ml多聚賴氨酸(PLL)包裹25μg/ml,50μg/ml,100μg/mlSPIO，并用PLL-SPIO孵育細(xì)胞24h、48h、72h。孵育結(jié)束后進(jìn)

2、行普魯士染色、鐵含量測定、透射電鏡等實(shí)驗(yàn)，來檢測細(xì)胞SPIO標(biāo)記率；采用3.0TMRI(T1WI、T2WI、T2*WI)掃描25μg/ml,50μg/ml,100μg/mlSPIO標(biāo)記細(xì)胞，并運(yùn)用MRI自動(dòng)測量系統(tǒng)，測量每種掃描序列圖像信號強(qiáng)度，來檢測不同濃度SPIO標(biāo)記細(xì)胞具體成像的差異；細(xì)胞周期、凋亡等實(shí)驗(yàn)，來檢測SPIO對細(xì)胞活性的影響；細(xì)胞分化誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)（成脂、成骨、成軟骨、成內(nèi)皮）來檢測SPIO對細(xì)胞分化能力的影響。
　　

3、結(jié)果：
　　普魯士染色:25μg/ml組標(biāo)記率(％)分別為70.1±9.4、75.5±8.6、76.3±7.9，與50μg/ml組、100μg/ml組相比不具有有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。鐵含量測定:25μg/ml組細(xì)胞含鐵量(pg/cell)為14.4±1.05、14.9±0.7、16.9±0.08，與50μg/ml組、100μg/ml組相比不具有有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。透射電鏡標(biāo)記:胞質(zhì)內(nèi)可見許多囊泡樣包涵體，囊泡內(nèi)有

4、濃聚細(xì)小的鐵顆粒。MRI掃描:T1WI、T2WI和T2*WI序列信號均呈低信號。其中，掃描106細(xì)胞，25μg/ml組、25μg/ml組、25μg/ml組信號平均降低(65.6±7.9)%、(70.2±0.8)%、(72.7±10.3)%，25μg/ml組與50μg/ml組、100μg/ml組不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。100μg/ml組rMSCs增殖指數(shù)(%)分別為19.9±1.4、10.1±0.3、9.5±0.2，與未標(biāo)記細(xì)胞

5、間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。對照組、25μg/ml組、50μg/ml組和100μg/ml組細(xì)胞vWF圖像灰度值分別為54.7±5.5、53.9±7.9、51.1±3.4、35.6±8.7。其中，僅100μg/ml組與未標(biāo)記細(xì)胞間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　0.75μg/ml多聚賴氨酸(PLL)包裹(25μg/ml)SPIO，孵育rMSCs24h即可有效標(biāo)記rMSCs。其中，100μg/ml SPIO孵