Edu標記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究.pdf

1、目的：使用不同濃度的Edu標記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，探討Edu標記骨髓間充質(zhì)干細胞的最佳濃度及時間組合。
　　方法：（1）采用全骨髓貼壁法分離純化骨髓間充質(zhì)干細胞，觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀檢測細胞周期和表面標記物，成骨成脂分化誘導(dǎo)鑒定。（2）分別采用0，10，20，50umol/L濃度的Edu及12，24，48，72h的標記時間標記骨髓間充質(zhì)干細胞，流式細胞儀測定標記率。挑選出12，24，48，72h時最優(yōu)的標記濃度，檢測各濃

2、度、各時間點Edu標記細胞的陽性率，觀察標記后細胞形態(tài)，并繪制標記細胞的生長曲線以及進行細胞標記后細胞活性檢測，增殖及誘導(dǎo)分化實驗。
　　結(jié)果：（1）骨髓間充質(zhì)干細胞的鑒定：形態(tài)學特征：接種24-48h后，出現(xiàn)貼壁細胞，多為圓形、短梭型、多角形，傳至第三代時細胞形態(tài)均一，呈單層貼壁生長，細胞多為長梭形，呈旋渦狀排列；流式細胞檢測其表面標記物CD90、CD29、CD45和CD11b表達分別為94.3％、99.4%、3.2%、5.7%

3、；經(jīng)成脂誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)14天后油紅O染色，倒置顯微鏡下觀察可見橘紅色脂滴，經(jīng)成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)21天后茜素紅染色，鏡下可見橘紅色鈣結(jié)節(jié)，堿性磷酸酶染色，鏡下可見藍紫色鈣結(jié)節(jié)形成。（2）各濃度組標記率隨標記時間延長而升高（P<0.05）；各時間點標記率隨標記濃度的升高而增加，但其差別無顯著性意義（P>0.05）。通過各實驗，得出最適濃度組合10umol/L48h。
　　結(jié)論： Edu標記骨髓間充質(zhì)干細胞簡單有效，體外標記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干