二甲雙胍對3T3-L1前脂肪細胞增殖和分化的影響.pdf

1、目的:
　　(1)研究二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖過程的影響;
　　(2)研究二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化過程的影響;
　　通過上述研究，探討二甲雙胍對脂肪細胞的作用，以期明確二甲雙胍對脂肪前體細胞增殖和分化過程的干預(yù)是否為二甲雙胍減輕體重的機制之一，進一步為肥胖的治療尋找新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　(1)3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖的測定:①用不同濃度的二甲雙胍(0.0

2、5mmol/L，0.5mmol/L，5mmol/L，10 mmol/L，20 mmol/L，50mmol/L)對體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖過程進行干預(yù)。②應(yīng)用倒置顯微鏡對細胞形態(tài)進行觀察，應(yīng)用MTT法測定二甲雙胍細胞增殖的影響并與對照組（二甲雙胍濃度為0mmol/L）進行對照。③應(yīng)用酶標(biāo)儀在OD570nm處測量各組光密度值，以此來判斷不同濃度二甲雙胍對細胞增殖的影響。
　　(2)3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化的測

3、定:①用不同濃度的二甲雙胍(0.05mmol/L，0.5mmol/L，5mmol/L)對體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化過程進行干預(yù)。②應(yīng)用倒置顯微鏡對細胞形態(tài)進行觀察，油紅O染色法鑒定脂肪細胞的分化程度，并與陰性對照組（未加成脂誘導(dǎo)液）和陽性對照組（加成脂誘導(dǎo)液，二甲雙胍濃度為0mmol/L）進行對照。③應(yīng)用酶標(biāo)儀在OD510nm處測量各組的光密度值，以此來判斷不同濃度二甲雙胍對細胞分化的影響。
　　結(jié)果:
　　

4、(1)二甲雙胍對細胞增殖的影響:
　　顯微鏡下觀察細胞形態(tài):在顯微鏡下觀察貼壁后的3T3-L1脂肪前體細胞，細胞成長條梭形，類似成纖維細胞。體外培養(yǎng)24小時，0.05mmol/L和0.5 mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比，鏡下細胞形態(tài)和密度無明顯差異，而5 mmol/L，10 mmol/L，20 mmol/L和50mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比，細胞形態(tài)發(fā)生改變（變形、破壞、凋亡小體形成），數(shù)量明顯減少。且為濃度依賴性，

5、濃度越高，細胞破壞越嚴(yán)重，細胞數(shù)量。繼續(xù)培養(yǎng)至72h，0.05 mmol/L和0.5 mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比，鏡下細胞形態(tài)和密度亦無明顯差異，而5 mmol/L，10 mmol/L，20 mmol/L和50mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比，隨著濃度的增加細胞破壞越嚴(yán)重，細胞數(shù)量越少。
　　測量各組光密度值:①0.05mmol/L（OD值:2.0±0.09）和0.5 mmol/L(OD值:1.99±0.09)二甲雙

6、胍和對照組（OD值:2.14±0.14）比較，均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。②5mmol/L(OD值:1.53±0.20)、10mmol/L(OD值:1.29±0.14)、20mmol/L(OD值:1.03±0.12)和50 mmol/L二甲雙胍（OD值:0.70±0.13）和對照組(OD值:2.14±0.14)比較，均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。③5mmol/L（OD值:1.53±0.20）、10mmol/L（OD值:1.2

7、9±0.14）、20mmol/L（OD值:1.03±0.12）和50 mmol/L二甲雙胍(OD值:0.70±0.13)各組之間比較，均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且濃度越高，光密度值越小。
　　(2)二甲雙胍對細胞分化的影響
　　顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（油紅0染色）:①陰性對照組細胞仍呈成梭形或橢圓形，油紅0染色無明顯著色。②陽性對照組可見80-90％的細胞細胞內(nèi)有脂滴聚積，油紅0染色著色明顯。③0.05 mmol/L和0

8、.5 mmol/L的二甲雙胍組亦可見80-90％的呈脂肪細胞表型，細胞內(nèi)有脂滴聚積，油紅0染色著色明顯，與陽性對照組相似。④5 mmol/L的二甲雙胍組脂肪細胞表型數(shù)量較對照組明顯減少，油紅0染色著色較對照組明顯減少。
　　測量各組光密度值:①陽性對照組（OD值:0.61±0.060）、0.05mmol/L(OD值:0.59±0.055)、0.5 mmol/L(OD值:0.59±0.047)和5 mmol/L(OD值:0.42±0

9、.027)和陰性對照組比較（OD值:0.34±0.017）均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。②0.05mmol/L（OD值:0.59±0.055）、0.5 mmol/L（OD值:0.589±0.047）二甲雙胍和陽性對照組（OD值:0.61±0.060）比較均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。③5 mmol/L(OD值:0.42±0.027)二甲雙胍和陽性對照組（OD值:0.61±0.060）比較，有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。

10、
　　結(jié)論:
　　(1)0.05、0.5 mmol/L的二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖無影響;大于5mmol/L的二甲雙胍明顯抑制3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖，且隨著藥物濃度的增加抑制作用增強;大于5 mmol/L的二甲雙胍可能有促進3T3-L1脂肪前體細胞細胞凋亡的作用。
　　(2)0.05、0.5 mmol/L的二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化過程無影響;5mmol/L的二甲雙胍抑制3T3