二甲雙胍對前脂肪細胞增殖分化的影響.pdf

1、目的：
　　以3T3-L1前脂肪細胞為研究對象，重點探討不同作用濃度Met對前脂肪細胞增殖分化的影響機制。觀察前脂肪細胞階段給予不同濃度二甲雙胍后，對前脂肪細胞增殖分化的影響，同時檢測成脂相關(guān)多種轉(zhuǎn)錄因子的變化情況。
　　方法：
　　購置3T3-L1前脂肪細胞進行培養(yǎng)，傳二代后，將脂肪細胞接種到孔板，培養(yǎng)24小時后，不同濃度的二甲雙胍0mM（control）、1mM、2mM、5mM、10mM作用48h。
　?。?

2、）用CCK-8檢測細胞增殖情況。
　　(2)收集細胞用RT-PCR技術(shù)檢測脂肪細胞中GATA3、PPAR-γ、C/EBPα、β-catenin mRNA表達水平。
　?。?）細胞過融合后，予成脂誘導液誘導成脂，A液3天，B液1天交替3次，共12天。誘導成脂后通過油紅O染色判定細胞成脂情況。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，以均數(shù)±標準差（x±s）的形式將研究所得結(jié)果進行表示，組間差異比較采用單因素方差分析，組間

3、多重比較用LSD檢驗，檢驗水準取α=0.05。
　　結(jié)果：
　?、貱CK-8細胞增殖實驗：1mM、2mM、5mM具有促增殖作用，不同濃度間無明顯差別；與1mM相比，10mM促增殖作用減弱。
　?、谟图tO染色結(jié)果顯示：與對照組對比，不同濃度的二甲雙胍對脂肪細胞成脂均有一定的抑制作用，其中10mM抑制作用最強（圖2-1）。
　?、?0mM二甲雙胍較0、1、2mM相比，明顯促進GATA3 mRNA的表達；10mM二甲雙

4、胍與5mM相比，明顯下調(diào)PPAR-γ mRNA的表達；與control相比,不同濃度二甲雙胍均可明顯抑制C/EBPα的表達，與5mM相比，10mM有抑制增強的趨勢。
　　④各濃度對β-catenin表達水平無顯著差別（表2-1）。
　　結(jié)論：
　　在前脂肪細胞階段給予二甲雙胍，10mM二甲雙胍可以明顯抑制脂肪細胞的成脂分化，其機制可能與促進GATA3，抑制PPAR-γ和C/EBPα有關(guān)。
　　近期研究表明，AIC

5、AR通過激活AMPK信號通路激活wnt經(jīng)典通路，促進GATA3的表達從而抑制前脂肪細胞成脂。PPAR-γ和C/EBPα是脂肪細胞中調(diào)控脂肪細胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄分子。β-catenin是wnt經(jīng)典通路的關(guān)鍵分子。本項目推測高濃度的Met可能激活AMPK途徑，促進GATA3表達，抑制PPAR-γ和C/EBPα，但β-catenin無變化，可能與β-catenin非依賴性的非經(jīng)典途徑有關(guān)，具體分子機制有待進一步的蛋白水平及基因敲除等實驗步驟的深