二甲雙胍對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響.pdf

1、目的：
　　以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象，重點(diǎn)探討不同作用濃度Met對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響機(jī)制。觀察前脂肪細(xì)胞階段給予不同濃度二甲雙胍后，對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響，同時(shí)檢測(cè)成脂相關(guān)多種轉(zhuǎn)錄因子的變化情況。
　　方法：
　　購(gòu)置3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，傳二代后，將脂肪細(xì)胞接種到孔板，培養(yǎng)24小時(shí)后，不同濃度的二甲雙胍0mM（control）、1mM、2mM、5mM、10mM作用48h。
　　（1

2、）用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　(2)收集細(xì)胞用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)脂肪細(xì)胞中GATA3、PPAR-γ、C/EBPα、β-catenin mRNA表達(dá)水平。
　?。?）細(xì)胞過(guò)融合后，予成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)成脂，A液3天，B液1天交替3次，共12天。誘導(dǎo)成脂后通過(guò)油紅O染色判定細(xì)胞成脂情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）的形式將研究所得結(jié)果進(jìn)行表示，組間差異比較采用單因素方差分析，組間

3、多重比較用LSD檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。
　　結(jié)果：
　?、貱CK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：1mM、2mM、5mM具有促增殖作用，不同濃度間無(wú)明顯差別；與1mM相比，10mM促增殖作用減弱。
　　②油紅O染色結(jié)果顯示：與對(duì)照組對(duì)比，不同濃度的二甲雙胍對(duì)脂肪細(xì)胞成脂均有一定的抑制作用，其中10mM抑制作用最強(qiáng)（圖2-1）。
　　③10mM二甲雙胍較0、1、2mM相比，明顯促進(jìn)GATA3 mRNA的表達(dá)；10mM二甲雙

4、胍與5mM相比，明顯下調(diào)PPAR-γ mRNA的表達(dá)；與control相比,不同濃度二甲雙胍均可明顯抑制C/EBPα的表達(dá)，與5mM相比，10mM有抑制增強(qiáng)的趨勢(shì)。
　?、芨鳚舛葘?duì)β-catenin表達(dá)水平無(wú)顯著差別（表2-1）。
　　結(jié)論：
　　在前脂肪細(xì)胞階段給予二甲雙胍，10mM二甲雙胍可以明顯抑制脂肪細(xì)胞的成脂分化，其機(jī)制可能與促進(jìn)GATA3，抑制PPAR-γ和C/EBPα有關(guān)。
　　近期研究表明，AIC

5、AR通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路激活wnt經(jīng)典通路，促進(jìn)GATA3的表達(dá)從而抑制前脂肪細(xì)胞成脂。PPAR-γ和C/EBPα是脂肪細(xì)胞中調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄分子。β-catenin是wnt經(jīng)典通路的關(guān)鍵分子。本項(xiàng)目推測(cè)高濃度的Met可能激活A(yù)MPK途徑，促進(jìn)GATA3表達(dá)，抑制PPAR-γ和C/EBPα，但β-catenin無(wú)變化，可能與β-catenin非依賴性的非經(jīng)典途徑有關(guān)，具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步的蛋白水平及基因敲除等實(shí)驗(yàn)步驟的深