野生型XPD轉(zhuǎn)染對膽管癌細胞生物學(xué)行為影響.pdf

1、目的:應(yīng)用野生型XPD基因轉(zhuǎn)染人膽管癌細胞QBC939,探討野生型XPD基因?qū)θ四懝馨┘毎纳飳W(xué)影響。
　　 方法:用堿裂解法提取重組質(zhì)粒pEGFP-N2一XPD和空載質(zhì)粒pEGFP-N2,所提取質(zhì)粒以KPNⅠ、BGⅠⅡ和SPHⅠ酶切鑒定。實驗分四組,重組質(zhì)粒pEGFP-N2-XPD組、空載質(zhì)粒pEGFP-N2組、脂質(zhì)體組,并用具有相同遺傳背景和代數(shù)的QBC939細胞作為空白對照組。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法瞬時轉(zhuǎn)染四組細胞。熒光顯微鏡下

2、觀察轉(zhuǎn)染后綠色熒光蛋白報告基因表達情況。提取各組細胞總RNA,合成cDNA,用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測四組細胞中XPD、p53、cyclinD1、c-myc表達情況,并用四甲基偶氮唑鹽(MTT)和流式細胞儀檢測細胞增殖及其細胞周期的變化。
　　 結(jié)果:1.RT-PCR檢測pEGFP-N2-XPD、pEGFP-N2、脂質(zhì)體組和空白對照組細胞中XPD mRNA相對表達量分別為:0.778±0.018、0.561±0.039、0.5

3、44±0.035、0.542±0.034;pEGFP-N2-XPD細胞與pEGFP-N2、脂質(zhì)體組和空白對照組相比,XPD mRNA表達量明顯增加(P<0.01)。四組細胞中p53 mRNA相對表達量為:0.421±0.019、0.256±0.014、0.267±0.015、0.274±0.018,pEGFP-N2-XPD細胞中p53 mRNA相對表達量與三對照組比較明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。四組細胞中cyclinD

4、1 mRNA相對表達量為:0.339±0.041、0.560±0.039、0.558±0.050、0.560±0.041,pEGFP-N2-XPD細胞與三對照組相比,cyclinD1 mRNA相對表達量明顯降低(P<0.01)。四組細胞中c-mycmRNA相對表達量為:0.355±0.045、0.570±0.075、0.560±0.041、0.537±0.050,pEGFP-N2-xPD細胞與三對照組相比,c-myc mRNA相對表達量

5、明顯降低(P<0.01)。2.流式細胞儀檢測pEGFP-N2-XPD組細胞周期G1期為81.65％,S期為11.83％,三對照組G1期分別為65.54％、56.61％、63.26％；S期分別為24.10％、29.52％、27.28％,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.MTT檢測示pEGFP-N2-XPD細胞生長率為0.249±0.02與三對照組相比,細胞增殖力明顯減弱(P<0.01)。
　　 結(jié)論:野生型XPD基因可以抑制