甘薯類(lèi)胡蘿卜素合成相關(guān)基因片段的克隆.pdf

1、類(lèi)胡蘿卜素是自然界分布最廣、種類(lèi)最豐富的色素，在植物、動(dòng)物、藻類(lèi)及藍(lán)細(xì)菌中都有重要的生物功能。為研究甘薯薯肉色突變體農(nóng)大輻14的類(lèi)胡蘿卜素合成發(fā)生突變的分子機(jī)理，本研究分析了突變體塊根膨大過(guò)程中類(lèi)胡蘿卜素含量的變化，并進(jìn)行類(lèi)胡蘿卜素合成相關(guān)基因片斷的克隆。主要結(jié)果如下:　　1、比色法測(cè)定結(jié)果表明，突變體中類(lèi)胡蘿卜素含量比對(duì)照提高5～10倍。隨著塊根的膨大，突變體中類(lèi)胡蘿卜含量明顯增加，而對(duì)照類(lèi)胡蘿卜素含量沒(méi)有明顯的變化。　　2、根據(jù)

2、雙子葉植物類(lèi)胡蘿卜素合成結(jié)構(gòu)基因氨基酸序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，擴(kuò)增出甘薯類(lèi)胡蘿卜素合成結(jié)構(gòu)基因(GGPS、PSY，PDS、ZDS、LYC-b)的cDNA片斷，所獲序列同其他植物類(lèi)胡蘿卜素合成結(jié)構(gòu)基因序列同源性非常高。　　3、通過(guò)RACE技術(shù)克隆了PDS基因的全長(zhǎng)cDNA，序列長(zhǎng)為2,128bp，具有完整的開(kāi)放閱讀框架，編碼572個(gè)氨基酸，與其他植物PDS基因高度同源。RT-PCR檢測(cè)表明，在突變體和對(duì)照塊根膨大過(guò)程中，PDS基因是

3、組成性表達(dá)的。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析結(jié)果表明，隨著塊根的膨大，突變體和對(duì)照PDS基因的表達(dá)逐漸下降。在塊根每個(gè)發(fā)育階段，突變體PDS基因的表達(dá)量均比對(duì)照大?！　?、cDNA-AFLP分析結(jié)果表明，突變體和對(duì)照塊根中的大部分基因表達(dá)是一致的。尋找到32條突變體和對(duì)照表達(dá)有明顯差異的基因片斷，測(cè)定其中6個(gè)片斷的基因序列。Blast結(jié)果表明，F(xiàn)ragment2部分序列同梨的推測(cè)與衰老有關(guān)的基因(AY436773.1)一致性達(dá)100％；Fra