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1、中山大學(xué)博士后出站報(bào)告一、利用siRNA抑制HepG2和K562細(xì)胞cyclinDl表達(dá)對(duì)其生物學(xué)特性的影響二、甲異靛抗腫瘤作用及機(jī)理的研究博士后:王一專業(yè):腫瘤學(xué)合作導(dǎo)師:劉宗潮教授姜文奇教授中山大學(xué)腫瘤防治中心廣州510060二零零六年三月廣州博士后出站報(bào)告王一摘要【背景l(fā)細(xì)胞周期素D1(CDl)是調(diào)控細(xì)胞周期的重要分子。CDl在多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),是影響腫瘤預(yù)后的獨(dú)立因素,因此CDl可能成為抗腫瘤治療的靶點(diǎn)。RNA干擾因?yàn)閷?duì)
2、目的基因抑制作用的高效性和特異性,而受到人們的高度關(guān)注。本研究采用siRNA方法沉默腫瘤細(xì)胞中CDl的表達(dá),并觀察其相關(guān)生物學(xué)特性的改變。【方法l按照RNAi靶點(diǎn)原則,設(shè)計(jì)出可能對(duì)CDl有干擾作用的序列,體外合成發(fā)夾結(jié)構(gòu),并將其連接到含U6啟動(dòng)子的質(zhì)粒PGE1上。將質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到HepG2和K562細(xì)胞中,利用RTPCR篩選出對(duì)HepG2和K562細(xì)胞的CDl有抑制作用的重組質(zhì)粒。觀察HepG2和K562細(xì)胞中CDl表達(dá)抑制后,細(xì)胞周期
3、的變化。篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞,并觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PGEsiRNACDl(可抑制HepG2和K562細(xì)胞中CDl表達(dá)的重組質(zhì)粒)后,HepG2和K562細(xì)胞中CDl在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)。觀察HepG2和K562細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PGE—siRNACDl后細(xì)胞生長(zhǎng)情況的改變,對(duì)Vpl6敏感性和Vpl6誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況的變化。【結(jié)果】設(shè)計(jì)出4個(gè)可能干擾序列,按照PGE一1質(zhì)粒的要求將其連接到PGE一1,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),含片段1命名為(PGE—
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