三七總皂苷對K562細胞抗腫瘤作用及機制的研究.pdf

1、目的：
　　(1)研究三七總皂苷(Panax notoginseng saponins，PNS)對體外培養(yǎng)K562細胞增殖、凋亡、周期及相關(guān)信號蛋白表達的影響。
　　(2)研究三七總皂苷體外作用K562細胞后對mTOR信號通路活性的影響。
　　(3)研究三七總皂苷聯(lián)合柔紅霉素對體外培養(yǎng)K562細胞增殖的影響。
　　方法：
　　(1)體外培養(yǎng)K562細胞，繪制其生長曲線。不同濃度的PNS(0～800μg/mL

2、)干預對數(shù)生長期的K562細胞24h、48h及72h后，MTT比色法檢測PNS作用后K562細胞的增殖變化； PNS(100μg/mL，200μg/mL及400μg/mL)干預對數(shù)生長期的K562細胞后，AO/EB雙熒光染色后使用熒光顯微鏡觀察對照組及加藥組細胞死亡及凋亡的形態(tài)變化；Annexin V-FITC/PI雙染色后使用流式細胞儀檢測對照組及加藥組細胞的凋亡率；PI單染后使用流式細胞儀檢測對照組及加藥組細胞周期的變化；蛋白印跡檢

3、測對照組及加藥組細胞cleaved caspase-3、cyclin D1、Fas蛋白表達量的變化。
　　(2) PNS(100μg/mL，200μg/mL及400μg/mL)干預對數(shù)生長期的K562細72h后，使用RT-PCR法檢測mTOR、p70S6K以及4E-BP1的mRNA表達情況；蛋白印跡法檢測mTOR、p-mTOR(Ser2448)、p70S6K、p-p70S6K(Thr229/389)、4E-BP1、p-4E-BP1

4、(Thr37/46)的蛋白表達量。
　　(3)柔紅霉素(DNR)(0～1.0μg/mL)單獨作用對數(shù)生長期的K562細胞24h、48h及72h后，MTT比色法檢測DNR對K562細胞增殖的抑制作用。PNS聯(lián)合低濃度DNR作用于體外培養(yǎng)K562細胞48h時間后，MTT法檢測細胞的增殖變化，AO/EB雙熒光染色后使用熒光顯微鏡觀察對照組及實驗組細胞死亡及凋亡的形態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　(1)在濃度為100～800μg/m

5、L時，PNS對 K562細胞有增殖抑制作用(P<0.05)，并呈現(xiàn)作用時間及藥物濃度依賴性，當作用時間為72h，PNS的IC50為(229.07±2.36)μg/mL。與對照組相比，100～400μg/mL PNS作用于K562細胞48h后，細胞凋亡率增加(P<0.05)，并且G0/G1期細胞增多(P<0.05)，而G2、S期細胞減少(P<0.05)，cleaved caspase-3蛋白表達上調(diào)(P<0.05)，cyclin D1蛋白

6、表達下降(P<0.05)，F(xiàn)as蛋白表達無明顯變化。
　　(2)與對照組相比，100～400μg/mL PNS作用于K562細胞72h后，mTOR mRNA表達量降低(P<0.05)，mTOR蛋白表達下降(P<0.05)，p70S6K及4E-BP1蛋白表達無明顯變化，磷酸化蛋白p-mTOR(Ser2448)、p-p70S6K(Thr229/389)和 p-4E-BP1(Thr37/46)的表達量下降(P<0.05)。
　　(

7、3) DNR(0.0625～1.0μg/mL)能夠明顯抑制K562細胞的增殖。PNS與DNR聯(lián)合作用后能提高其對K562細胞的增殖抑制率。
　　結(jié)論：
　　(1) PNS能夠抑制K562細胞增殖，促進K562細胞凋亡，上調(diào)cleaved caspase3蛋白表達，并使其發(fā)生周期阻滯，下調(diào)cyclin D1蛋白表達。
　　(2) PNS使K562細胞mTOR信號通路活性降低，mTOR蛋白表達下調(diào)，mTOR、p70S6K和