家蠅蛹凝集素對HepG2細(xì)胞的抗腫瘤作用及機(jī)理研究.pdf

1、凝集素(Lectin)是一種能與糖專一性、非共價可逆結(jié)合、可促使細(xì)胞凝集的糖蛋白。凝集素分布廣泛，在自然界中幾乎無處不在。因為凝集素具有潛在的巨大的免疫作用，包括抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和抑菌等作用，近年來凝集素的研究越來越受到關(guān)注。
　　本實驗室前期用D-半乳糖為配基的Sepharose 4B進(jìn)行親和層析，再經(jīng)過DEAE離子交換樹脂沈脫得到一種凝集素，命名為MPL-3。家蠅蛹凝集素已經(jīng)被證實可以抑制癌細(xì)胞的增長，然而具體的作用機(jī)制還不清

2、楚。
　　本實驗中，通過細(xì)胞增殖抑制試驗證明，家蠅蛹凝集素MPL-3可以明顯抑制人類肝癌細(xì)胞HepG2的生長，呈明顯的濃度依賴性，48小時的IC50為46.10μg/mL。HE染色和Hoechst33342染色都能觀察到典型的凋亡形態(tài):細(xì)胞核萎縮和聚集，細(xì)胞變圓。流式細(xì)胞儀結(jié)果也證實了凋亡的發(fā)生，并顯示細(xì)胞被阻斷在S期。MPL-3能夠誘導(dǎo)線粒體產(chǎn)生活性氧(ROS)并積累，其誘導(dǎo)的凋亡可以被NAC（ROS的抑制劑）逆轉(zhuǎn)，證實活性氧參

3、與了MPL-3誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞凋亡。MPL-3同時導(dǎo)致了磷酸化JNK（應(yīng)激活化蛋白激酶）的活化，其誘導(dǎo)的凋亡可以被SP600125（JNK的抑制劑）逆轉(zhuǎn)，證實了JNK也參與了MPL-3誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞凋亡。免疫印跡法測和免疫熒光染色結(jié)果表明，凝集素能抑制NF-κB/p65從細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞核轉(zhuǎn)移。JNK的活化可以被NAC抑制，但不被PDTC(NF-κB的抑制劑)影響，表明ROS調(diào)控JNK的磷酸化;SP600125和NAC均可以抑制細(xì)