慢病毒介導(dǎo)bcr-abl基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562細(xì)胞生物學(xué)特性與姜黃素抗腫瘤作用影響及其相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、福建醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)bcrabl基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562細(xì)胞生物學(xué)特性與姜黃素抗腫瘤作用影響及其相關(guān)機(jī)制研究姓名：吳枝娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)（腫瘤藥理）指導(dǎo)教師：許建華20090401：、Ber／abl基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562細(xì)胞生物學(xué)特性及榴關(guān)基因液達(dá)的影響ber／abt墓囂怒專翁爿＆發(fā)生、發(fā)震、轉(zhuǎn)髑整窩褥關(guān)煞瘓基篷。bcr／abl基霞長(zhǎng)囊拜缺席“，可能導(dǎo)致K562細(xì)胞各種生物學(xué)特讎及相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)的變能。本部分

2、，我們羹bcr／ab|基囂長(zhǎng)鬻漂默辯B／AK562鬈熬勢(shì)模型，與委鬻黯照蕤K562燕魏及空冀囂對(duì)照的EGFPK562細(xì)胞進(jìn)行比較，分析冀主要生物學(xué)特性及信號(hào)分予的變化。磷究方法；(1≥鬟交簦染慧注襝溺熬魏壤墓篷辦變霓；《2)集薄綹爨法黧察ILNAi對(duì)集落形成能力的影響；(3)聯(lián)苯胺染色觀察細(xì)胞分化；(4)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周麓變純；《耋≥ELISA裝撿測(cè)蠹囊c酸激簿活縫；≤≤≥AOEB、Heochst33342染毽麓察纓胞凋亡#(7)比

3、悒法檢測(cè)Caspase。3、Caspase9活性；(8)Westernblotting法觀察RNAi黠囊麓增疆灞亡檁關(guān)臻母勢(shì)子瓣影璃。絡(luò)果顯示；(1)bcr／ablRNAi顯著抑制K562綱胞增殖，細(xì)胞倍增時(shí)間明恩延長(zhǎng)；(2≥bcr／ablRNAi攆裁絮臆集薄形成，纂落澎袋簿镅拳遮籍越鞴；《3)ber／abt輪漱i誘導(dǎo)K562細(xì)胞廊成熟紅添分化，聯(lián)苯胺染色陽(yáng)性辮達(dá)2483％；(4)bcr／abl烈越使纘麓藺裁避滯在S鬻，密現(xiàn)灝亡的受二贊

4、體蜂；≤5)bcr／abl裝鬻轟i愛懿氮酸激黧活性降低約4188％；(6)bcr／ablRNAi誘鐐K562細(xì)胞凋亡，自發(fā)凋亡率達(dá)忿667％；(≯≥bcr／abtRNAi簸發(fā)線粒律CytC釋艘，Caspase。3及Caspase。9活襤提嵩，敝線糙體途襁誘導(dǎo)綱胞凋亡；(8)bcr／ablRNAi下調(diào)K562細(xì)胞Src、PSrc、Raf1、PErku2、PStarl、PStar5、P_P38、Cmyc、Bcl2幫Hsp90含量，上調(diào)羚3、

5、PKC及Bax禽爨，對(duì)Erkv2、PAkt、NF憋、Hsp70影螭不太。墨、慢瘸棗舟導(dǎo)berlabl基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562纓腱裰鬣成癀的影嗡及棚關(guān)枧制研究幔瘸毒介譬戇RNA干擾，在律外能奧現(xiàn)bcr／abl基巡熊長(zhǎng)期沉默，抑制K562細(xì)胞增楚，誘導(dǎo)箕向成熟氯系緇魔分化，蓰避細(xì)脆褥亡。本幫分我們關(guān)注的是：B／AK562纓照在襟鼠體內(nèi)然孬繼續(xù)保持黠bcr／abl基因靛RNA干擾以殿成癌麓力彝捆美信號(hào)分子懿燮純。研巍方法；《1)皮下注射K562