PSMA對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、研究背景:
　　 前列腺癌(Prostate Cancer，PCa)是西方男性最常見的惡性腫瘤之一，在我國隨著診斷水平的提高、人們生活方式的改變和人口的老齡化，發(fā)病率和死亡率逐年增高。對(duì)早期前列腺癌采用根治性手術(shù)治療效果較好，但大多數(shù)前列腺癌患者確診時(shí)已是進(jìn)展期或晚期，腫瘤浸潤到前列腺外或者已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，對(duì)于這些患者，采用目前的治療方法效果均不佳，因此有必要尋找一種新的治療晚期前列腺癌的有效途徑。基因治療是近年來研究的熱點(diǎn)，隨著

2、分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，基因治療已發(fā)展成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一個(gè)全新領(lǐng)域，基因治療有望成為晚期前列腺癌治療的一個(gè)新途徑。
　　 對(duì)前列腺癌進(jìn)行基因治療需要尋找一個(gè)理想的靶點(diǎn)，而前列腺特異性膜抗原(Prostate Specific Membrane Antigen，PSMA)是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。PSMA是一種前列腺癌相關(guān)抗原，由于它具有較高的特異性和位于前列腺上皮細(xì)胞膜的特性，且在前列腺癌及其轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)增高，因此在

3、前列腺癌的早期診斷、判斷病情進(jìn)展、預(yù)后以及在前列腺癌的治療中具有重大意義。PSMA在前列腺正常組織、前列腺增生組織、前列腺癌組織中的表達(dá)依次上升，在前列腺癌組織中，其表達(dá)水平與病情進(jìn)展有明顯的相關(guān)性，發(fā)生轉(zhuǎn)移的、對(duì)雄激素非依賴的、Gleason評(píng)分較高的病例表達(dá)水平明顯高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的、對(duì)雄激素依賴的、Gleason評(píng)分低的病例，并且PSMA在腫瘤新生血管系統(tǒng)表達(dá)，而在正常組織血管內(nèi)皮不表達(dá)。
　　 終上所述，我們猜測(cè)PSMA與

4、前列腺癌細(xì)胞的增殖、分裂、遷移、侵襲等行為是否存在著一定的聯(lián)系?
　　 本課題組的前期研究針對(duì)PSMA構(gòu)建了shRNA慢病毒載體，轉(zhuǎn)染能高表達(dá)PSMA的前列腺癌LNCaP細(xì)胞后，通過real-time PCR檢測(cè)PSMA mRNA的表達(dá)水平，通過Western blot檢測(cè)PSMA蛋白的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)PSMA的mRNA和蛋白均能被穩(wěn)定抑制，從而獲得了能穩(wěn)定低表達(dá)PSMA的前列腺癌LNCaP細(xì)胞。同時(shí)也培養(yǎng)了未處理的前列腺癌LNC

5、aP細(xì)胞及獲得了轉(zhuǎn)染了與人類基因無同源性、對(duì)PSMA不起干擾作用的siRNA的前列腺癌LNCaP細(xì)胞。
　　 研究目的:
　　 研究PSMA對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，為進(jìn)一步研究PSMA在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起的作用打下基礎(chǔ)。
　　 研究方法:
　　 實(shí)驗(yàn)分組：
　　 1)PSMA基因被穩(wěn)定抑制的前列腺癌LNCaP細(xì)胞株(實(shí)驗(yàn)組)；
　　 2)未進(jìn)行處理的前列腺癌LNC

6、aP細(xì)胞株(空白組)；
　　 3)轉(zhuǎn)染了與人類基因無同源性、對(duì)PSMA不起干擾作用的siRNA的前列腺癌LNCaP細(xì)胞株(對(duì)照組)。
　　 以上述三組細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)、流式檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)，從而比較不同組細(xì)胞的生物學(xué)行為的變化。MTT實(shí)驗(yàn)：處理后在特定時(shí)間點(diǎn)測(cè)定相應(yīng)的OD值，檢測(cè)不同組細(xì)胞的增殖能力，繪制生長(zhǎng)曲線。
　　 流式檢測(cè)細(xì)胞周期：通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞

7、周期，根據(jù)處于細(xì)胞周期中S期細(xì)胞的比例，分析不同組細(xì)胞之間的分裂能力。
　　 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)：劃痕后在特定時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行顯微鏡下拍照，定性判斷不同組細(xì)胞的遷移能力。
　　 Transwell實(shí)驗(yàn)：通過此實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同組細(xì)胞的遷移、侵襲能力。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.MTT實(shí)驗(yàn)：處理后分別檢測(cè)12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)、60小時(shí)、72小時(shí)、84小時(shí)、96小時(shí)三組細(xì)胞OD值，繪制生長(zhǎng)曲線，結(jié)果判斷實(shí)驗(yàn)

8、組細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)能力較空白組、對(duì)照組降低。
　　 2.流式檢測(cè)細(xì)胞周期：實(shí)驗(yàn)組S期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)較空白組及對(duì)照組的減少，實(shí)驗(yàn)組G0-G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)較空白組及對(duì)照組的增加，說明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞發(fā)生G0期阻滯，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分裂能力減弱。
　　 3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)：劃痕后于0小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微鏡下拍照，通過觀察所劃痕跡縮窄的程度，定性判斷實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞遷移能力弱于空白組的和對(duì)照組的，而空白組和對(duì)照組比較差別不明顯。