低頻低能量超聲聯(lián)合微泡對人前列腺癌細胞PC-3生物學行為的影響.pdf

1、目的:對超聲功率、輻照時間、微泡/細胞懸液體積比參數(shù)進行優(yōu)化，確定超聲聯(lián)合微泡誘導人前列腺癌細胞PC-3的凋亡的最優(yōu)參數(shù)組合并且探討超聲聯(lián)合微泡對人雄激素非依賴型前列腺癌細胞PC-3凋亡及侵襲轉(zhuǎn)移的影響、探討其機制。
　　方法:(1)選定超聲功率、輻照時間、微泡/細胞懸液體積比三因素，超聲功率（實驗中分組采用電功率15mW/cm2、20mW/cm2、25mW/cm2、30mW/cm2等分分組，論文中采用實測功率描述）:46mW/c

2、m2，78mW/cm2，138mW/cm2，199mW/cm2。輻照時間:30s，60s，90s，120s。微泡/細胞懸液體積比:10％，20％，30％，40％。每因素4個水平設(shè)定正交設(shè)計表，按正交設(shè)計表所列實驗進行超聲輻照，輻照后細胞繼續(xù)培養(yǎng)24小時，用流式細胞儀進行細胞凋亡檢測，確定最優(yōu)參數(shù)。
　　(2)利用第一步優(yōu)化的參數(shù)，以頻率21kHz、聲強為46mW/cm2超聲，采用連續(xù)波，輻照人前列腺癌PC-3細胞懸液。實驗分3組:

3、對照組、單純超聲組和超聲聯(lián)合微泡組（加聲諾維200μl）。輻照后，CCK-8、細胞集落實驗檢測對細胞增殖的影響;輻照后培養(yǎng)24h，透射電鏡及TUNEL染色、流式細胞儀檢測細胞凋亡，實時定量PCR及Western-blot檢測對Bcl-2、Bax表達的影響。
　　(3)利用第一步優(yōu)化的參數(shù)，以頻率21kHz、聲強為46mW/cm2超聲，采用連續(xù)波，輻照人前列腺癌PC-3細胞懸液。實驗分3組:對照組、單純超聲組和超聲聯(lián)合微泡組（加聲諾

4、維200μl）。輻照后，CCK-8繪制細胞生長曲線;輻照后培養(yǎng)12h，Transwell小室模型進行細胞體外侵襲及轉(zhuǎn)移實驗，實時定量PCR及Western-blot檢測對MMP-2、MMP-9表達的影響。
　　結(jié)果:(1)對細胞凋亡的影響因素，超聲功率＞微泡/細胞懸液體積＞輻照時間;各因素水平影響:超聲功率:46mW/cm2＞138mW/cm2＞78mW/cm2＞199mW/cm2;輻照時間:30s＞60s＞120s＞90s;微泡

5、/細胞懸液體積:20％＞10％＞30％＞40％。
　　(2)超聲聯(lián)合微泡組細胞集落數(shù)量明顯少于對照組，OD值明顯減小(P＜0.05)，超聲聯(lián)合微泡能明顯抑制人前列腺癌細胞的增殖;超聲聯(lián)合微泡組較對照組能明顯誘導細胞凋亡(P＜0.05);超聲聯(lián)合微泡能夠下調(diào)Bcl-2的表達，上調(diào)Bax的表達（P＜0.05）。
　　(3)輻照后各組細胞繼續(xù)培養(yǎng)12h時各組細胞生長區(qū)別不明顯（均P＞0.05）;輻照后12h，超聲聯(lián)合微泡組侵襲細胞

6、數(shù)量明顯少于對照組(P＜0.05);超聲聯(lián)合微泡組轉(zhuǎn)移細胞數(shù)量明顯少于對照組（P＜0.05）;超聲聯(lián)合微泡能夠下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)低頻低功率超聲聯(lián)合微泡誘導人雄激素非依賴型前列腺癌細胞PC-3凋亡最佳組合為超聲功率46mW/cm2，輻照時間30s，微泡/細胞懸液體積比20％。
　　(2)低頻低能量超聲聯(lián)合微泡能夠抑制人雄激素非依賴型前列腺癌細胞PC-3增殖，并誘導人雄激素非依賴