下調(diào)miRNA-21的表達(dá)對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　探究下調(diào)miR-21的表達(dá)對(duì)雄激素非依賴(lài)型前列腺癌PC-3細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及潛在的分子機(jī)制
　　方法：
　　1.檢測(cè)不同前列腺癌細(xì)胞系中miR-21的表達(dá)量
　　通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)雄激素依賴(lài)型前列腺癌細(xì)胞LNcap和雄激素非依賴(lài)型前列腺癌細(xì)胞PC-3中miR-21表達(dá)量的的差異。
　　2.構(gòu)建低表達(dá)miR-21的穩(wěn)定PC-3細(xì)胞株
　　通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，分別將miR-

2、21 inhibitor（低表達(dá)miR-21組）和NC（陰性對(duì)照組）轉(zhuǎn)染至PC-3細(xì)胞中。經(jīng)過(guò)一定濃度G418篩選鑒定后，得到低表達(dá)miR-21的細(xì)胞株。
　　3.在穩(wěn)定低表達(dá)miR-21的細(xì)胞株中進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)
　　通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力、利用流式細(xì)胞術(shù)AnnexinⅤ-FITC雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡、通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力、利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力。
　　4.在穩(wěn)定低表達(dá)m

3、iR-21的細(xì)胞株中進(jìn)行分子機(jī)制的探討
　　通過(guò)Real-time PCR技術(shù)及WB技術(shù)分別檢測(cè)TIMP3在基因和蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.Real-time PCR的結(jié)果顯示，PC-3細(xì)胞中miR-21的表達(dá)量比LNcap細(xì)胞高。
　　2.轉(zhuǎn)染miR-21 inhibitor后，PC-3細(xì)胞中miR-21的表達(dá)水平顯著降低。
　　3.在PC-3細(xì)胞中，下調(diào)miR-21的表達(dá)后，其增殖、遷移及侵

4、襲能力較對(duì)照組顯著下降，凋亡能力較對(duì)照組顯著增強(qiáng)。
　　4.miR-21下調(diào)后，其靶基因TIMP3在基因和蛋白水平較對(duì)照組顯著升高。
　　結(jié)論：
　　1.雄激素非依賴(lài)型前列腺癌細(xì)胞比雄激素依賴(lài)型前列腺癌細(xì)胞miR-21表達(dá)量高，提示miR-21可以作為腫瘤進(jìn)展的分子標(biāo)志物。
　　2.成功構(gòu)建了低表達(dá)miR-21的穩(wěn)定PC-3細(xì)胞株。
　　3.在PC-3細(xì)胞中下調(diào)miR-21的表達(dá)可使得其增殖、遷移和侵襲能力