芍藥苷對黑素瘤A375增殖及NF-κB影響的研究.pdf

1、目的：
　　探討不同濃度芍藥苷(paeoniflorin,PF)對人黑素瘤細胞株A375細胞增殖抑制率、細胞凋亡率的影響以及對該細胞株p16INK4a、p14INK/ARF、核因子-κB(NF-κB)亞基p65的mRNA水平的影響,為其臨床應(yīng)用及進一步深入研究提供基礎(chǔ)。
　　方法：
　　以A375細胞為研究對象,設(shè)定空白對照組及5個相應(yīng)實驗組,芍藥苷含量分別為0、0.01mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、

2、1.0mg/ml、2.0mg/ml培養(yǎng)液處理(芍藥苷純度≥92％)。①倒置顯微鏡觀察各組細胞密度及形態(tài)的變化;②MTT比色法檢測在干預(yù)24、48和72小時后各濃度藥物對A375細胞的增殖抑制率的作用;③AnnexinV/PI試劑盒染色后,采用流式細胞儀檢測在干預(yù)24小時后各濃度藥物對A375細胞的早期凋亡率的影響;④SYBRGreen-PCR檢測在干預(yù)24、48和72小時后各組A375細胞p16INK4a、p14INK/ARF、NF-κ

3、B亞基p65的mRNA水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1、倒置顯微鏡觀察顯示芍藥苷能抑制A375細胞的生長,隨著濃度的增大其密度減小,細胞逐漸呈現(xiàn)短而粗的樹枝狀胞體,而不是正常的細長樣核周體和雙極樹突樣胞體。2、MTT結(jié)果顯示芍藥苷能抑制A375細胞的增殖,且其抑制作用呈濃度依賴性,而無時間依賴性。3、AnnexinV/PI染色法-流式細胞儀結(jié)果顯示各組中A375細胞的早期凋亡率無顯著差異(P>0.05)。4、SYBRGree

4、n-PCR結(jié)果顯示:①芍藥苷能促進A375細胞p16INK4a的mRNA轉(zhuǎn)錄水平,與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且其促進作用呈濃度依賴性,而無時間依賴性;②芍藥苷能抑制A375細胞中NF-κB亞基p65的mRNA轉(zhuǎn)錄,與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且其抑制作用呈濃度依賴性,而無時間依賴性;③芍藥苷對A375細胞p14INK/ARF的mRNA水平無明顯影響(P>0.05)。
　　結(jié)論：