姬松茸粗多糖對HL-60細(xì)胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影響.pdf

1、背景及目的：
　　急性早幼粒細(xì)胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)是一種以骨髓中大量的異常早幼粒細(xì)胞積聚,并伴有嚴(yán)重出血傾向?yàn)樘卣鞯陌籽☆愋?在FAB分型中屬M(fèi)3型急性髓系白血病,常伴有t(15;17)(q22;q12)染色體易位所致的PML-RARα融合基因出現(xiàn)。在目前的治療中,以全反式維甲酸和砷劑化療為主,療效較好,但同時(shí)也有比較嚴(yán)重的毒副作用,如維甲酸綜合征及砷劑的毒性作用。因此尋找高效

2、低毒、副作用少的藥物對APL治療很有必要。
　　姬松茸學(xué)名agaricusblazeimurrill(ABM),又稱巴西蘑菇,是一種藥食皆用的大型真菌?？梢蕴岣邫C(jī)體免疫力,常作為一種保健食品。目前研究顯示姬松茸提取物姬松茸粗多糖對人肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等實(shí)體瘤具有抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用。NF-κB是一組作用廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子,參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞,調(diào)控多種基因的表達(dá)。NF-κB在多種實(shí)體瘤細(xì)胞中都有異常活化表達(dá),有研究表明抑制

3、NF-κB的異常激活,可以促進(jìn)實(shí)體瘤細(xì)胞凋亡。急性髓系白血病造血干細(xì)胞中93％的細(xì)胞NF-κB異?；罨磉_(dá)。本次研究通過體外培養(yǎng)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞,研究姬松茸粗多糖對HL-60細(xì)胞增殖、凋亡的影響,以及對NF-κB活性的影響。為姬松茸粗多糖應(yīng)用于急性早幼粒細(xì)胞白血病治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)以及新的治療思路。
　　材料和方法：
　　1.急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞在含10%胎牛血清,100U/mL青

4、霉素和100U/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。
　　2.在培養(yǎng)HL-60細(xì)胞過程中加入ABM粗多糖,使得ABM粗多糖終濃度為1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL。分別培養(yǎng)HL-60細(xì)胞12h、24h、48h,以不含ABM粗多糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)HL-60細(xì)胞做為對照組;用WST-1法檢測ABM粗多糖對HL-60細(xì)胞增殖的影響;用流式細(xì)胞分析儀檢測ABM粗多糖對HL-60細(xì)胞凋亡的影響;用免疫熒光法檢

5、測ABM粗多糖對HL-60細(xì)胞NF-κB活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.ABM粗多糖對HL-60細(xì)胞增殖的影響:用含不同濃度ABM粗多糖(1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL)的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HL-60細(xì)胞12h、24h、48h。①培養(yǎng)12h后,10mg/mL組對HL-60細(xì)胞增殖有抑制作用(P<0.05);②培養(yǎng)24h后,2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL組對HL-60細(xì)胞增殖有抑制作用,且隨

6、著濃度增加抑制作用也有增強(qiáng)的趨勢(P<0.05);③培養(yǎng)48h后,1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL各組對HL-60細(xì)胞增殖有抑制作用,隨著濃度增加抑制作用也有增強(qiáng)的趨勢(P<0.05)。提示:在一定濃度范圍內(nèi),ABM粗多糖以劑量依賴方式抑制HL-60細(xì)胞增殖(P<0.05)。
　　2.ABM粗多糖對HL-60細(xì)胞凋亡的影響:用含不同濃度ABM粗多糖(1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL)

7、的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HL-60細(xì)胞12h、24h、48h后,HL-60細(xì)胞早期凋亡率均較各自對照組增加(P<0.05)。①培養(yǎng)12h后,10mg/mL組較其他濃度組早期凋亡率增加(P<0.05)。而1-5mg/mL組間早期凋亡率無差異;②培養(yǎng)24h后,1-10mg/mL組均使HL-60細(xì)胞早期凋亡率增加,且隨著濃度增加,早期凋亡率也增加(P<0.05);③培養(yǎng)48h后,1-5mg/mL組使HL-60細(xì)胞早期凋亡率增加,且隨著濃度增加,早期凋

8、亡率也增加(P<0.05),而10mg/mL組早期凋亡率較低,可能與凋亡早期細(xì)胞進(jìn)入凋亡晚期有關(guān)。
　　3.ABM粗多糖對HL-60細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性的影響:用含不同濃度ABM粗多糖(1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL)的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HL-60細(xì)胞48h后,用免疫熒光法染色。然后在熒光顯微鏡下觀察NF-κB核轉(zhuǎn)運(yùn)情況并拍片。用IPP6.0軟件分析得到ABM粗多糖濃度在1-10mg/mL時(shí),所對應(yīng)I

9、OD分別為:5481.82±5340.31,4570.21±2828.79,2320.33±3896.60,1404.11±1615.22,對照組為6952.58±19628.98。細(xì)胞核內(nèi)NF-κBP65IOD隨著濃度增加而逐漸減弱(P<0.05),提示ABM粗多糖可以阻止HL-60細(xì)胞NF-κB異常活化。
　　結(jié)論：
　　1.ABM粗多糖可以抑制HL-60細(xì)胞增殖,呈劑量依賴方式。
　　2.ABM粗多糖可以誘導(dǎo)HL