芍藥苷對膽紅素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡及NF-kB活性的影響.pdf

1、目的:
　　 探討芍藥苷(paeoniflorin,PF)對膽紅素誘導(dǎo)原代培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)元凋亡和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(Nuclear transcription factor-κB,NF-κB)活化的影響,及調(diào)控凋亡的可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 取胎齡17～19 d大鼠的海馬神經(jīng)元進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),于原代培養(yǎng)第7天完全隨機(jī)分為:正常對照組(加DMSO)、膽紅素組(加10μg/ml膽紅素)和經(jīng)芍藥苷預(yù)處理的膽紅素組,

2、后者再按所用芍藥苷的劑量分為PF1組、PF2.5組、PF5組,分別用1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml的芍藥苷預(yù)處理24 h后棄去,再加入膽紅素。經(jīng)MTT法測定海馬神經(jīng)元存活率及Hoechst33342 DNA染色法觀察神經(jīng)元凋亡形態(tài)和凋亡率后,篩選出芍藥苷預(yù)處理的適當(dāng)劑量:進(jìn)而采用Annexin V-FITC/PI雙染色法觀察此劑量芍藥苷對膽紅素誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡形態(tài)和凋亡率的影響,并采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測膽紅素作用后不同時間(

3、3,6,12,24h)神經(jīng)元內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 (1)與正常對照組比較,膽紅素作用24 h可顯著降低海馬神經(jīng)元存活率并升高神經(jīng)元凋亡率(P≤0.001)。
　　 (2)與膽紅素組比較,PF(1,5μg/ml)預(yù)處理24 h可顯著降低海馬神經(jīng)元凋亡率(P＜0.01),但不能明顯提高神經(jīng)元存活率(P＞0.05),而PF(2.5μg/m1)預(yù)處理24 h可顯著提高海馬神經(jīng)元存活率,降低神經(jīng)

4、元凋亡率(P＜0.01)。
　　 (3)與正常對照組比較,膽紅素作用3～12 h引起NF-κB活化增加(P＜0.05),但以3～6 h顯著(P＜0.05);而采用2.5μg/ml芍藥苷預(yù)處理24 h可顯著抑制3～6 h NF-κB的活化(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)膽紅素誘導(dǎo)的NF-κB活化有時間依賴性,在其作用3～6 h達(dá)高峰,膽紅素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡可能與此時期的NF-κB活化相關(guān);