45444.蘇云金芽胞桿菌幕蟲亞種晶胞粘連現(xiàn)象與其內(nèi)生質(zhì)粒有關

1、華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文蘇云金芽胞桿菌幕蟲亞種晶胞粘連現(xiàn)象與其內(nèi)生質(zhì)粒有關姓名：鞠守勇申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：孫明20060601華中農(nóng)業(yè)大學碩士論文鞠守勇摘要蘇云金芽胞桿菌幕蟲亞種(Bacillusthuringiensissubspfinitimus)YBT020，含有三個內(nèi)生質(zhì)粒，能形成兩種伴胞晶體。當芽胞形成細胞裂解后，一種晶體被釋放出來，形成自由的伴胞晶體，另一種在芽胞外壁內(nèi)側形成，成熟后被包裹在

2、芽胞外壁以內(nèi)不脫落，始終和芽胞粘連在一起。PCR篩選了2162個經(jīng)過高溫消質(zhì)粒處理的YBT020菌落，其中75個消除了cry26Aa基因：19個菌落同時消除了cry26Aa和cry28Aa基因。通過脈沖電泳和Southern雜交分析得到了僅消除cry26Aa所在質(zhì)粒的菌株BMBI151和其無質(zhì)粒的菌株BMBl152。從形態(tài)學，生理生化和SDSPAGE三個方面對YBT020，BMBll51和BMBll52做了進一步分析。將cry26Aa和

3、cry28Aa兩個基因分別和同時在YBT020無質(zhì)粒的菌株BMBll52中表達，發(fā)現(xiàn)晶體與芽胞獨立存在不能粘連；將cry26Aa在僅消除cry26Aa所在質(zhì)粒的菌株BMBl151中表達，發(fā)現(xiàn)晶體與芽胞也獨立存在不能粘連，從而推測晶胞粘連現(xiàn)象與cry26Aa所在內(nèi)生質(zhì)粒有關。為進一步闡述晶胞粘連的分子機制指明了研究的方向和提供了很好的受體材料。目前電轉(zhuǎn)化的方法普遍用于蘇云金芽胞桿菌基因工程，但是電轉(zhuǎn)化的過程中容易造成野生菌株發(fā)生突變(內(nèi)生

4、質(zhì)粒丟失等)，而且很難將較大質(zhì)粒(30Kb)電轉(zhuǎn)化進入蘇云金芽胞桿菌中，目前還沒有好的方法來實現(xiàn)蘇云金芽胞桿菌較大質(zhì)粒(30Kb)的轉(zhuǎn)化。通過將OriT插入到穿梭載體pHT304中構建了含有OriT位點的可誘動穿梭質(zhì)粒pBMB0951，在菌株EcoliS171或者幫助質(zhì)粒pRK2073的作用下，將大腸桿菌中的質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移到了蘇云金芽胞桿菌庫斯塔克亞種無質(zhì)粒菌株BMBl71中，從而實現(xiàn)對蘇云金芽胞桿菌的改造，為下一步野生性菌株接合轉(zhuǎn)移系統(tǒng)