蘇云金芽胞桿菌擬步行甲亞種菌株YBT-1765的質(zhì)粒研究.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌菌株YBT-1765是從糧食倉庫中分離得到的一株擬步行甲亞種(H<,8ab>)菌株。該菌株至少含有三個(gè)內(nèi)生質(zhì)粒，本文對其可檢測到的最大質(zhì)粒pBMB165的復(fù)制區(qū)和最小質(zhì)粒pBMB175的研究結(jié)果如下： 1.質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子的研究克隆并分析了包含質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子的一個(gè)20kb的DNA片段(GenBank登錄號為：DQ242517)。通過缺失實(shí)驗(yàn)，將質(zhì)粒 pBMB165的復(fù)制子縮短到一個(gè)3.6kb的片段

2、上。同時(shí)證明，質(zhì)粒編碼的復(fù)制蛋白 Rep165 和兩個(gè)順式作用因子(復(fù)制起點(diǎn)ori165 和重復(fù)子 iterons 區(qū)域)為質(zhì)粒復(fù)制必需因子。還發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)重疊的開放閱讀框：ORF6和ORF10，能參與控制質(zhì)粒穩(wěn)定性，為質(zhì)粒穩(wěn)定遺傳必需因子。這是首例報(bào)道的來源于擬步行甲亞種質(zhì)粒復(fù)制子。 通過序列分析，質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子與θ復(fù)制pAMβ1家族質(zhì)粒的復(fù)制子具有同源性，該質(zhì)粒也應(yīng)屬于pAMβ1質(zhì)粒家族。此外，芽胞桿菌群中pAMβ1

3、家族質(zhì)粒(pBMB165，pBT9727，pAW63和pXO2)復(fù)制區(qū)之間還表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)組成的相似性，但是與其它細(xì)菌中的pAMβ1家族質(zhì)粒復(fù)制子的結(jié)構(gòu)組成不同，表現(xiàn)出該家族質(zhì)粒復(fù)制子的遺傳可變性。 另一方面，在質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子相鄰區(qū)域含有五個(gè)可能的轉(zhuǎn)座因子。其中，IS231U為一種新的IS231類插入序列；根據(jù)序列的相似性，ISBth165、ISBth166和ISBth167分別屬于IS5、IS110和IS3家族轉(zhuǎn)座因子；

4、TnBMB165是一個(gè)不完整的Ⅱ型轉(zhuǎn)座子。這些轉(zhuǎn)座因子的存在，可能引起遺傳物質(zhì)的交換和重組，從而導(dǎo)致質(zhì)粒或質(zhì)粒復(fù)制子的進(jìn)化，為研究pAMβ1質(zhì)粒家族質(zhì)粒及其復(fù)制子的進(jìn)化提供了有用的遺傳信息。 2.菌株YBT-1765消除質(zhì)粒突變株的篩選將出發(fā)菌株YBT-1765采用逐級升溫培養(yǎng)以及十二烷基磺酸鈉(SDS)處理的方法，篩選得到兩株質(zhì)粒部分消除突變株，其中，突變株BMB193消除了YBT-1765中可檢測的最大質(zhì)粒pBMB165；突

5、變株BMB175則只含有出發(fā)菌株中的最小質(zhì)粒pBMB175。 3.質(zhì)粒pBMB175的克隆和分析克隆得到菌株YBT-1765中大小為14，841bp的最小質(zhì)粒pBMB175(GenBank 登錄號為：DQ364061)。序列分析表明，pBMB175含有18個(gè)ORFs(大于70個(gè)氨基酸)。其中，8個(gè)ORFs(編碼假定蛋白)與蘇云金亞種滾環(huán)復(fù)制質(zhì)粒pGI3的ORFs有不同程度的同源性。 通過缺失分析，將質(zhì)粒pBMB175復(fù)制