犬細小病毒VP2基因的分子生物學特性的研究.pdf_第1頁
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1、揚州大學碩士學位論文犬細小病毒VP2基因的分子生物學特性的研究姓名：楊玲申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：劉秀梵張如寬20020401AbstractApairofprimersweredesignedandsynthesizedbasedonVP2geneofCPVfromGenebankThegenomicDNAsamplesofcanineparvovirusstrainisolatedinYangzl30uwereex

2、tractedandusedaStemplatesforpolymerasechainreaction(PCR)toamplifytheVP2geneThespecific1740bpbandWaSamplifedandclonedintopUCl8vectorattherestrictionendonucleaseEcoRIandSalIsitesTherecombinantpalsmidswereidentifiedbyrestri

3、ctionendonueleaseanalysisTheexogenousinsertofrecombinantplasmidWaSfurtherconfirmedbysequenceanalysisAftersequencing，VV2geneofYangzhouisolationWascomparedwiththatofAmericanreferencestrainsCPVd(type2)，CPV15(type2a)，CPV39(t

4、ype2b)Theresultsshowed995％，997％997％homologyamongthesedifferentstrainsVP2fragmentsfiromCPVYangzhoustrainwereamplifiedwithanothertwopairsofprimersPCRfragmentswereclonedtothedownstreamofGSTgeneaccordingtothefightOpenReading

5、FrameinpGEX6p1vectorAfterinducingwith10mMIPTGand37。CtheinsertswereexpressedastwofusionproteinscontainingtheGSTproteinAccordingtoSDSPAGEanalysistwoGSTVP2fusionproteinswerefoundas54kDand61kDbandsrespectivelyTheexpressedpro

6、ductsⅥ啪extractedfromthegelandadded髂immunogentoimmunizemiceintrapedtoneally5doseswithone—weekintervalsThespecificityofantibodyw觴detectedpositivelyagainstCPV—infectedFK81cellintheindirectinamunofluorescentassay(IFA)Theresu

7、ltsofthestudyshowedthattheinvitroexpressedproductsofVP2genemaintainedthenaiveantigenicityofCPVThesequenceanalysisofVP2genewillcontributetothestudyofantigenicdrift，andthefusionproteinswillbeusefulforthegenerationofspecifi

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